PLD2 Rabbit mAb

目录号：F1493

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生物描述

特异性

PLD2 Rabbit mAb 可检测内源性总 PLD2 的蛋白水平。
背景

磷脂酰胆碱特异性磷脂酶 D (PLD) 催化磷脂酰胆碱 (PC) 水解生成胆碱和磷脂酸 (PA)，其中 PA 是第二信使二酰甘油 (DAG) 的前体。PLD 有两种主要同工型：PLD1 和 PLD2。PLD2 在基础条件下主要定位于质膜，在那里它与脂筏中的受体结合；而 PLD1 位于核周膜中，并在细胞刺激后转移到质膜。 PLD2 的激活由蛋白激酶 C (PKC) 和受体（例如 EGFR、PDGFR）和非受体酪氨酸激酶（例如 Src、JAK3）介导，而 PLD1 由 PKC、酪蛋白激酶 II 和小 GTP 酶（例如 ARF 和 RHO）激活。与 PLD1 相比，PLD2 表现出更高的基础活性，并且不仅作为磷脂酶发挥作用，而且作为鸟嘌呤核苷酸交换因子 (GEF) 发挥作用。PLD2 活性通过复杂的磷酸化和去磷酸化途径进行调控，主要作用于酪氨酸残基，涉及与 S6K、Grb2、Sos、WASp 和 Rac2 等蛋白质的相互作用。PLD2 异构体在各种癌症中高度表达，包括结直肠癌和乳腺癌，并且还充当小 GTP 酶 Rac2 的 GEF，与其磷脂酶功能无关。

使用信息

抗体应用 WB 稀释比例
WB
1:1000
反应性 Human
抗体类型 Rabbit MW 95 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
Western Blotting
 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: Hela
    Lane 2: A549
    Lane 3: HUVEC

IHC

Validated by Selleck

  • Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human Colorectal cancer tissue with F1493 at 1/100 dilution.