目录号:F1164

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生物描述

特异性

SENP1 Rabbit mAb检测内源性SENP1总蛋白水平。

背景

SUMO的去SUMO化,即从底物蛋白中去除SUMO,是由SUMO/sentrin特异性蛋白酶(SENPs)介导的,这是一个由六个半胱氨酸蛋白酶(SENP1、SENP2、SENP3、SENP5、SENP6、SENP7)组成的家族。基于序列同源性、细胞定位和底物特异性,SENPs被分为三个亚家族。SENP1和SENP2可以解耦SUMO1和SUMO2/3,而其他亚家族则倾向于SUMO2/3。SENP1是该家族中首次报道的哺乳动物酶,主要定位于细胞核,由染色体12q13.11上的SENP1基因编码。SENP1含有特征性的半胱氨酸蛋白酶三联体(Cys603, His533, Asp550),并将SUMO前体加工成成熟形式,从靶蛋白中释放SUMO。SENP1参与肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭、转移、干化、血管生成、代谢、耐药等多种生理病理过程,在多种癌症中高表达,发挥致癌作用。

使用信息

抗体应用 WB, IHC-P, F, ICC/IF 稀释比例
WB IHC IF FCM
1:1000 1:100 - 1:300. 1:100 - 1:500 1:50-1:200
反应性 Human
抗体类型 Rabbit MW 73 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
实验步骤:
 
样品制备
1. 组织样品:破碎组织,加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含PMSF),低温匀浆。
2. 贴壁细胞样品:吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含PMSF),冰上静置裂解 5 min。
3. 悬浮细胞样品:将培养基转移至离心管中离心,弃上清,用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含PMSF),冰上静置裂解 5 min。
4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min,收集上清液;
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度;
6. 加入蛋白上样缓冲液,将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min,冰上静置冷却后离心 5 min。
 
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度,将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶(即下层胶)浓度:10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表
2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V,观察 Marker,待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后,即可停止电泳。(注意电泳时电流切勿过大,如超过 150 mA 会导致温度上升,容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流,可对电泳槽使用冰浴降温。)
 
转膜
1.拿出电转槽,把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中;
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min,用转移缓冲液冲洗;
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好;
4.将蛋白电转移至 PVDF膜上(推荐采用 0.45 µm PVDF 膜)。 PVDF 膜孔径规格选择参照表
湿转法参考条件:200 mA, 120 min。(电转条件可根据蛋白大小适当调节,分子量大的蛋白适宜采用大电流,并延长转膜时间,但需要确保电转槽始终处于低温的环境中,避免凝胶融化。)
 
封闭(可选)
1. 电转移后,室温下用 TBS 洗膜 5 min;
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h,室温;
3. 用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min。
 
抗体孵育
1. 用 5% 的脱脂奶粉来配制一抗工作液(建议一抗稀释比 1:1000),4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜;
2. 用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min;
3. 在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h;
4. 孵育结束后,用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min。
 
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀;
2. 与膜孵育1 min,去除多余底物(需保持膜湿润),置于显影仪中进行曝光。
 

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: Daudi
    Lane 2: Jurkat
    Lane 3: HUVEC
    Lane 4: HeLa
    Lane 5: U87-MG

IHC

Validated by Selleck

  • Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human Breast Cancer tissue with F1164 at 1/100 dilution.