STAT5 Antibody [B9G7] Datasheet

生物描述

特异性	STAT5 Antibody [B9G7] 可检测内源性 STAT5 总蛋白水平。该抗体检测 STAT5 的 α 和 β 亚型（STAT5a 和 STAT5b）。
背景	信号转导和转录激活因子5 (STAT5) 包含两种高度同源的异构体 STAT5A 和 STAT5B，它们是细胞因子和生长因子信号传导的关键介质。这些转录因子在配体与细胞因子受体结合后，由Janus激酶（JAK1、JAK2 和 JAK3）激活。多种配体（包括白细胞介素-2 (IL-2)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF)、生长激素和催乳素）均可触发 STAT5 激活。受体刺激后，STAT5 蛋白发生酪氨酸磷酸化、二聚化（形成同源二聚体或异源二聚体），并转位至细胞核，在那里调控靶基因的转录。STAT5 信号传导是调控多种生物过程的基础，包括细胞增殖、分化、存活以及造血和肝细胞代谢等组织特异性功能。 STAT5 的活性必须受到精确调控：过度活化会导致癌症、骨髓增生性疾病、慢性炎症和自身免疫性疾病等病理状态，而活化不足则会导致贫血、血小板减少、侏儒症、不育症、免疫缺陷和代谢功能障碍。STAT5A 和 STAT5B 均存在多种较短的异构体，这些异构体通过选择性剪接和翻译后加工产生。这些蛋白质进一步受到磷酸化（丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基）、泛素化和糖基化的调控，从而影响其稳定性、二聚化能力和转录输出。通过形成不同的二聚体复合物，STAT5 协调对维持正常细胞稳态和协调全身生理反应至关重要的基因表达程序。

特异性

STAT5 Antibody [B9G7] 可检测内源性 STAT5 总蛋白水平。该抗体检测 STAT5 的 α 和 β 亚型（STAT5a 和 STAT5b）。

背景

信号转导和转录激活因子5 (STAT5) 包含两种高度同源的异构体 STAT5A 和 STAT5B，它们是细胞因子和生长因子信号传导的关键介质。这些转录因子在配体与细胞因子受体结合后，由Janus激酶（JAK1、JAK2 和 JAK3）激活。多种配体（包括白细胞介素-2 (IL-2)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF)、生长激素和催乳素）均可触发 STAT5 激活。受体刺激后，STAT5 蛋白发生酪氨酸磷酸化、二聚化（形成同源二聚体或异源二聚体），并转位至细胞核，在那里调控靶基因的转录。STAT5 信号传导是调控多种生物过程的基础，包括细胞增殖、分化、存活以及造血和肝细胞代谢等组织特异性功能。 STAT5 的活性必须受到精确调控：过度活化会导致癌症、骨髓增生性疾病、慢性炎症和自身免疫性疾病等病理状态，而活化不足则会导致贫血、血小板减少、侏儒症、不育症、免疫缺陷和代谢功能障碍。STAT5A 和 STAT5B 均存在多种较短的异构体，这些异构体通过选择性剪接和翻译后加工产生。这些蛋白质进一步受到磷酸化（丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基）、泛素化和糖基化的调控，从而影响其稳定性、二聚化能力和转录输出。通过形成不同的二聚体复合物，STAT5 协调对维持正常细胞稳态和协调全身生理反应至关重要的基因表达程序。

使用信息

抗体应用

WB, IP, ChIP

稀释比例

WB	IP	CHIP
1:1000	1:100	1:50

反应性

Mouse, Rat, Human

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

90 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

[1] Kornfeld JW, et al. Front Biosci. 2008 May 1:13:6237-54.

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: K562, Lane 2: MOLT4, Lane 3: A20, Lane 4: Daudi