TCF12/HEB Rabbit mAb

目录号：F1357

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生物描述

特异性

TCF12/HEB Rabbit mAb识别内源性TCF12/HEB总蛋白。该抗体识别TCF12/HEBCan亚型，但不识别TCF12/HEBAlt亚型。
背景

HEB 是 E 蛋白转录因子家族的成员，该家族包括 E2A (TCF3) 和 E2-2 (TCF4)。这些蛋白质作为专性二聚体调节基因转录，相互配对或与 II 类碱性螺旋-环-螺旋因子配对。HEB 由 TCF12 基因位点产生，由于替代转录起始和剪接，以典型 HEB 蛋白 (HEBCan) 和较短变体 (HEBAlt) 的形式存在。HEB 对 T 淋巴细胞生成、神经发生和肌肉生成至关重要。HEB 缺乏会对中胚层形成以及随后的造血和 T 细胞发育产生负面影响，这些缺陷可以通过异位 HEB 表达来纠正。 HEB 在人类造血基因调控网络中起着关键作用，主要影响的是造血前发育和 T 细胞前体的形成。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1:1000 1:50
反应性 Human
抗体类型 Rabbit MW 85 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜(湿转法参考条件: 200mA 120min)。
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: Jurkat
    Lane 2: MOLT-4