TEAD4 mAb Datasheet

生物描述

特异性	TEAD4 mAb 检测内源性 TEAD4 总的蛋白水平。
背景	TEA 域转录因子 4 (TEAD4) 是 YAP 转录复合物中的关键 DNA 结合蛋白，受 Hippo 信号通路调控。后生动物中这种高度保守的通路通过调控细胞增殖和凋亡来控制器官大小。TEAD4 可作为致癌基因、表观遗传调控因子和线粒体调控因子。其完全转录活性需要辅激活因子，例如 Yes 相关蛋白 (YAP) 或其同源物 TAZ（具有 PDZ 结合基序的转录辅激活因子），它们充当信号枢纽，将细胞外信号传递到基因转录。TEAD4 在决定胚泡分化方面起着关键作用，并通过促进转移、癌症干细胞和对治疗的抵抗力来促进肿瘤发生。虽然它主要是一种核蛋白，但在某些条件下，如渗透应激、细胞密度或精氨酸可用性，其定位会转移到细胞质中。TEAD4 分布在各种细胞中细胞核、细胞质和线粒体等细胞区域，在这些区域，它参与了细胞核和线粒体环境中氧化磷酸化 (OXPHOS) 基因的转录激活。TEAD4 的过度表达已在多种癌症中观察到，包括结肠癌、胃癌、乳腺癌和前列腺癌，使其成为一种有价值的预后标志物。其致癌活性和其他功能受到其亚细胞定位的严格调控，强调了其在细胞和病理过程中的多方面作用。

特异性

TEAD4 mAb 检测内源性 TEAD4 总的蛋白水平。

背景

TEA 域转录因子 4 (TEAD4) 是 YAP 转录复合物中的关键 DNA 结合蛋白，受 Hippo 信号通路调控。后生动物中这种高度保守的通路通过调控细胞增殖和凋亡来控制器官大小。TEAD4 可作为致癌基因、表观遗传调控因子和线粒体调控因子。其完全转录活性需要辅激活因子，例如 Yes 相关蛋白 (YAP) 或其同源物 TAZ（具有 PDZ 结合基序的转录辅激活因子），它们充当信号枢纽，将细胞外信号传递到基因转录。TEAD4 在决定胚泡分化方面起着关键作用，并通过促进转移、癌症干细胞和对治疗的抵抗力来促进肿瘤发生。虽然它主要是一种核蛋白，但在某些条件下，如渗透应激、细胞密度或精氨酸可用性，其定位会转移到细胞质中。TEAD4 分布在各种细胞中细胞核、细胞质和线粒体等细胞区域，在这些区域，它参与了细胞核和线粒体环境中氧化磷酸化 (OXPHOS) 基因的转录激活。TEAD4 的过度表达已在多种癌症中观察到，包括结肠癌、胃癌、乳腺癌和前列腺癌，使其成为一种有价值的预后标志物。其致癌活性和其他功能受到其亚细胞定位的严格调控，强调了其在细胞和病理过程中的多方面作用。

使用信息

抗体应用

WB

稀释比例

WB

1:1000

反应性

Human

抗体类型

Mouse

MW

48 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 53.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

53.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

[1] Hsu SC, et al. Front Cell Dev Biol. 2022 May 5:10:890419.

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: A549
Lane 2: A549 (TEAD4 CRISPR-Cas9 edited)
Lane 3: T-47D
Lane 4: Hela