目录号：F1624

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生物描述

特异性

TGF β1 Rabbit mAb 可检测内源性 TGF β1 总的蛋白水平。
背景

转化生长因子 (TGF-β) 家族包含多种生长因子，可调控多种细胞反应，在大多数人体组织的发育和维持中发挥关键作用。该超家族包括几个蛋白质组，例如激活素/抑制素家族、骨形态发生蛋白 (BMP)、生长分化因子 (GDF)、TGF-β 亚家族和神经胶质细胞系衍生的神经营养因子 (GDNF) 家族。在哺乳动物中，TGF-β 有三种同工型——TGF-β1、TGF-β2 和 TGF-β3。虽然它们共享高度保守的区域，但它们也有明显的氨基酸差异。尽管存在这些差异，但所有三种同工型都通过相同的受体途径发出信号。 TGF-β1 是最丰富且表达最广泛的同工型，最初从人类足月胎盘 mRNA 中克隆而来。TGF-β 配体通过三种细胞表面受体启动信号传导：I 型 (RI)、II 型 (RII) 和 III 型 (RIII) TGF-β 受体。I 型和 II 型受体是丝氨酸/苏氨酸激酶，当配体与 II 型受体结合时，会形成异源复合物。这会导致 I 型受体的磷酸化和活化。TGF-β 信号通路的破坏与各种人类疾病有关，包括实体瘤和血液肿瘤。尽管 TGF-β 通常通过抑制细胞增殖来充当肿瘤抑制因子，但在肿瘤细胞中，它通常会失去这种抗增殖功能并成为致癌因子。

使用信息

抗体应用 WB, IHC 稀释比例
WB IHC
1:1000 1:500
反应性 Human, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 44 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
Western Blotting
 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 90min)
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: A549
    Lane 2: K-562
    Lane 3: HL-60
    Lane 4: C6
    Lane 5: L-929
    Lane 6: RAW264.7
    Lane 7: Mouse spleen