Datasheet

生物描述

特异性	Tri-Methyl-Histone H4 (Lys20) Rabbit mAb仅识别在Lys20位点三甲基化的内源性组蛋白H4蛋白。该抗体不与非甲基化、单甲基化或二甲基化组蛋白H4 Lys20发生交叉反应。该抗体检测一种来源未知的95 kDa非特异性蛋白。
背景	Tri-Methyl-Histone H4 (Lys20)，也被称为H4K20me3，是一种特殊的组蛋白翻译后修饰，对维持基因组完整性和调节染色质结构至关重要。组蛋白H4赖氨酸20甲基化存在三种状态:单甲基化(H4K20me1)、二甲基化(H4K20me2)和三甲基化(H4K20me3)， H4K20me3是组蛋白H4赖氨酸20残基上的三甲基化标记。这种修饰在从酵母到人类的进化上是保守的，并作为转录沉默异染色质的标记，表明基因组中不活跃转录的区域。H4K20me3在特定的基因组位置高度富集，如中心外异染色质、端粒、印迹区和重复元件，在维持这些区域处于抑制状态中发挥作用。无论在没有或存在基因毒性应激的情况下，它都对基因组完整性至关重要，构成了更广泛的DNA损伤反应(DDR)网络的一部分。酶SUV4-20H1和SUV4-20H2主要介导H4K20的三甲基化。H4K20的不同甲基化状态在整个细胞周期中动态变化。与H4K20me1相比，H4K20me3更加稳定，变化较小。H4K20me3增强染色质折叠，并在染色质框架中发挥结构作用。H4K20甲基化的适当调节对于维持染色质结构和功能至关重要，因为这种调节的破坏会导致基因组不稳定和其他细胞功能障碍。

特异性

Tri-Methyl-Histone H4 (Lys20) Rabbit mAb仅识别在Lys20位点三甲基化的内源性组蛋白H4蛋白。该抗体不与非甲基化、单甲基化或二甲基化组蛋白H4 Lys20发生交叉反应。该抗体检测一种来源未知的95 kDa非特异性蛋白。

背景

Tri-Methyl-Histone H4 (Lys20)，也被称为H4K20me3，是一种特殊的组蛋白翻译后修饰，对维持基因组完整性和调节染色质结构至关重要。组蛋白H4赖氨酸20甲基化存在三种状态:单甲基化(H4K20me1)、二甲基化(H4K20me2)和三甲基化(H4K20me3)， H4K20me3是组蛋白H4赖氨酸20残基上的三甲基化标记。这种修饰在从酵母到人类的进化上是保守的，并作为转录沉默异染色质的标记，表明基因组中不活跃转录的区域。H4K20me3在特定的基因组位置高度富集，如中心外异染色质、端粒、印迹区和重复元件，在维持这些区域处于抑制状态中发挥作用。无论在没有或存在基因毒性应激的情况下，它都对基因组完整性至关重要，构成了更广泛的DNA损伤反应(DDR)网络的一部分。酶SUV4-20H1和SUV4-20H2主要介导H4K20的三甲基化。H4K20的不同甲基化状态在整个细胞周期中动态变化。与H4K20me1相比，H4K20me3更加稳定，变化较小。H4K20me3增强染色质折叠，并在染色质框架中发挥结构作用。H4K20甲基化的适当调节对于维持染色质结构和功能至关重要，因为这种调节的破坏会导致基因组不稳定和其他细胞功能障碍。

使用信息

抗体应用

WB, ChIP, CUT&Tag

稀释比例

WB	IP	CHIP
1:1000	1:50-1:200	1:50

反应性

Human, Mouse, Rat, Monkey

抗体类型

Rabbit

MW

11 Kda

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃

储存条件
(自收到货起)

–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：20 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 60 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：20 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 60 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

[1] Jørgensen S, et al. Nucleic Acids Res. 2013;41(5):2797-2806.

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: Hela
Lane 2: NIH3T3