ABCG1 Rabbit mAb
目录号: F1575
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Lane 1: Rat liver
Lane 2: HepG2
Lane 3: RAW 264.7
操作要点
WB
蛋白定位
内质网; 高尔基体 内膜; 细胞膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IF |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Cow |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 75 kDa |
| 阳性对照 | rat kidney; rat liver; MDBK; HUVEC; HepG2; RAW 264.7 |
|---|---|
| 阴性对照 | MDBK |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
| IF |
|---|
实验步骤：
标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
ABCG1 Rabbit mAb 可检测内源性总 ABCG1 的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P45844 |
| 克隆号 |
|---|
| A22P24 |
| 背景 |
|---|
ABCG1 是 ATP 结合盒 (ABC) 转运蛋白超家族的一部分，在维持细胞内胆固醇和脂质平衡方面发挥关键作用。作为半型 ABC 转运蛋白，ABCG1 形成同型二聚体以有效发挥作用，将胆固醇、磷脂酰胆碱和鞘磷脂从细胞转运到高密度脂蛋白 (HDL) 颗粒。该过程对于防止胆固醇积聚（特别是在巨噬细胞中）至关重要，并有助于降低动脉粥样硬化的风险。ABCG1 与另一种 ABC 转运蛋白 ABCA1 协同作用，促进胆固醇从细胞中清除。其活性受肝脏 X 受体 (LXR)、类视黄酸 X 受体 (RXR) 和各种微小 RNA 等因素控制，确保其功能与身体的脂质水平密切相关。它还通过抑制细胞凋亡、炎症和氧化应激发挥重要的神经保护作用。 ABCG1 基因的高甲基化导致其表达减少，这与胆固醇代谢紊乱、胰岛素分泌受损和泡沫细胞形成增加有关。这可能导致 2 型糖尿病、代谢综合征和与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的发展。 |
| 参考文献 |
|---|
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