Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)是一种氧化还原反应的指示剂，在电子载体1-Methoxy PMS存在的条件下，利用活细胞中的脱氢酶催化四唑盐WST®-8生成甲臜染料（图1），而且甲臜染料的生成量与活细胞的数量成线性关系（图2）。该试剂的灵敏度高于MTT、XTT、MTS或WST-1等其他四唑盐。
Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)细胞活性检测试剂为一瓶即开即用的溶液，该试剂安全，无放射性，性价比高，为客户提供方便、快速、可靠的使用体验。

图1: Working mechanisms of Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

图2: 使用Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)进行细胞计数和OD值的比较。按不同的密度将K562和Hela细胞接种在96孔板的100 μl培养基中（每个样品进行三个重复）. 培养16h后，在孔中添加10 μl Cell Counting Kit-8 (CCK-8)，并在培养箱按指定时间进行孵育。用培养基作为空白对照，在酶标仪450 nm下检测光吸收值。

图3: 使用Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)进行细胞计数和OD值的比较。按不同的密度将HEK293细胞接种在96孔板的100 μl培养基中（每个样品进行三个重复）. 培养16h后，在孔中添加10 μl Cell Counting Kit-8 (CCK-8)，并在培养箱按指定时间进行孵育。用培养基作为空白对照，在酶标仪450 nm下检测光吸收值。

需要的实验器材

• 酶标仪
• 多道移液器
• 3 % SDS（可选）

实验步骤

1) 接种细胞于培养瓶并使之生长4–24小时，然后开始检测。
2) 在细胞培养液中直接加入1/10体积的Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)，充分混合，保证孔中颜色均一性，但不可有气泡产生。对96孔板，每100µl培养液加入10µl活性检测试剂。
3) 继续培养1-4小时至颜色变为橙色，如细胞密度/活力过低，可适当延长培养时间至24小时，但需注意不可孵育过度。
4) 用酶标仪读取450nm光吸收值。典型的OD值在0.8-1.5之间，但0.5-2.5都是可接受的范围。
注意：在添加Cell Counting Kit-8 (CCK-8)的细胞培养基中，在450nm处会有轻微的自发吸收值。该荧光背景随培养基、pH值、培养时间、暴露于光线的时间等因素的变化而变化。典型的吸收值在孵育2小时后为0.1-0.2。为了纠正背景，准备一个或多个无细胞的对照孔，计算其平均的荧光值，然后从试验孔中扣除该值。
5) 可选步骤：在100μl细胞中加入10 μl 3 % SDS 以终止反应，可在3天内读取数据。
6) 细胞活力计算：
细胞活力*（％）=[A（药物+）— A（空白）] / [A（药物—）— A（空白）] ×100%
A（药物+）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度；
A（药物—）：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度；
A（空白）：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度。
*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

实验简要流程

应用领域

1) 细胞增殖测定——Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)具有水溶性、稳定性好、无细胞毒性。
2) 细胞活力检测——细胞代谢活力与橙色的产生随细胞活力的变化而变化。
3) 细胞因子实验——测定细胞因子诱导的细胞增殖，克隆形成及生长。
4) 细胞毒性实验——有毒的化学物质会导致细胞死亡，但死亡的细胞不会还原WST8，只有剩余的活细胞能够显色。Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)本身对细胞无毒性。

注意事项

1. 使用前请充分混匀，避免反复冻融。
2. 如果长时间孵育（过夜），请确保在试剂添加与孵育期间维持无菌状态。细菌也能够是本试剂显色。
3. 使用本品必须包含阳性、阴性和无细胞（纯培养液）对照。
4. 本产品只能用于研究，不能用于药物、日常生活等其他方面。