小鼠CD4⁺ T细胞分选试剂盒

小鼠CD4⁺ T 细胞分选试剂盒采用磁珠进行阴性分选，从小鼠脾脏或淋巴结的单细胞悬液中分离出 CD4⁺ T 细胞（不区分naive CD4⁺ T细胞和非naive CD4⁺ T细胞）。原理是选用不同的生物素（biotin）标记单克隆抗体对非目标细胞（非CD4⁺ T 细胞）进行标记，而后通过链霉亲和素（streptavidin）标记的磁珠对非目标细胞进行清除，从而达到小鼠CD4⁺ T 细胞分选的目的。分选过程需要用到磁力架。

应用范围

分选小鼠脾脏CD4⁺ T细胞

分选小鼠淋巴结CD4⁺ T细胞

应用范围

从 C57BL/6 小鼠脾脏细胞中分选 CD4⁺ T 细胞，分选前后的细胞用 FITC anti-mouse CD4 抗体（克隆号GK1.5）标记后进行流式细胞仪分析，分选前后的CD4⁺ T 细胞纯度分别为 20.3%和 98.8%。

产品组成

以分选小鼠脾脏CD4⁺ T 细胞为例

1. 制备单细胞悬液：在70 μm细胞筛网上研磨脾脏，以预冷的PBS冲洗细胞筛网，收集细胞悬液于50 ml离心管中，500 g，离心5 min。
2. 离心完成后，弃上清，加入5 ml ACK红细胞裂解液，室温裂解5 min，再加入20 ml PBS，500 g，离心5 min。
注意：红细胞裂解步骤可根据所用裂解液不同调整用量及时间。少量红细胞残留不会影响后续分选及细胞纯度。
3. 离心完成后，弃上清，将脾细胞重悬于PBS，细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤后，计数。计数完成后，继续以500 g，离心5 min。
4. 离心完成后，弃上清，将细胞重悬于分选buffer中，调整细胞密度为1×10⁸ cells/ml。
注意：分选buffer为含有2 mM EDTA和2%胎牛血清（FBS）的 PBS 或者含有 2mM EDTA 和 0.5% BSA 的 PBS，需预先通过 0.22 μm 滤膜过滤除菌。
5. 将 100 μl细胞悬液（1×10⁷ 个细胞）加入无菌流式管底部，再加入2 μl Biotin-Ab Mix，混匀后4℃孵育10 min。
注意：加入细胞悬液时将细胞加入流式管底部，避免沿流式管管壁加入。根据所使用磁力架特点也可使用离心管进行细胞分选。如果分选更多细胞，则按比例增加Biotin-Ab Mix用量。
6. 孵育完成后，在流式管中加入20 μl Streptavidin beads（使用前涡旋振荡重悬磁珠），混匀后4℃孵育10 min。孵育过程中应轻轻敲打管壁1~2次，防止细胞和beads沉降。
注意：如果分选更多细胞，则按比例增加Streptavidin beads用量。例如分选5×10⁷细胞，则应在500 μl细胞悬液中加入10 μl Biotin-Ab Mix和100 μl Streptavidin beads。如果分选少于1×10⁷ 个细胞，则将细胞悬液体积补至100 μl，使用2 μl Biotin-Ab Mix和20 μl Streptavidin beads。
7. 孵育完成后，在流式管加入2.5 ml分选buffer，以移液器上下混合吹打5次混匀（避免剧烈振荡或者上下颠倒混匀）。
8. 将含有细胞的分选流式管置于磁力架上（若没有合适的磁力架，可将流式管中液体转移到15 mL离心管中再置于磁力架上），静置5 min。
9. 将细胞悬液轻柔倒入无菌离心管中（倾倒过程中流式管不要脱离磁力架）或用吸管吸入离心管中（勿将液体吸尽，防止吸到磁珠），500 g，离心5 min。细胞悬液中即包含纯化的小鼠CD4⁺ T细胞，离心后弃上清，收集细胞。
10. 根据实验需要洗涤细胞后，将细胞重悬于所需缓冲液或培养基中，即可用于后续分子生物学或细胞生物学实验。