Akt1 Rabbit mAb
目录号: F0217
客户使用Selleck的Akt1 Rabbit mAb发表文献5篇
操作要点
WB
蛋白定位
细胞膜; 细胞质; 内膜; 线粒体; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 60 kDa |
| 阳性对照 | HeLa; NIH/3T3; C6; COS-7; MEF |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤：
电泳分离
1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳；
2.电源调80V，30分钟。然后电源调（110V~150V），观察Marker，待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流不要太大，电流太大（超过150mA）会导致温度上升，影响跑胶结果。如无法避免大电流，可以对电泳槽冰浴来降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化PVDF膜1分钟，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；
4.电源200mA，100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。（注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节，电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好，但需要保持电转槽在低温的环境中，避免胶的融化。推荐不要超过250mA，120分钟。）
封闭(可选)
1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟；
2.在封闭液中孵育膜1小时,室温；
3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。
抗体孵育
1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液（一抗稀释比1: 1000）,4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；
2.用TBST洗膜3次,每次5分钟；
3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时；
4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
显色
1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀；
2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润)，置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
Akt1 Rabbit mAb 用于检测内源性 Akt1 总的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P31749 |
| 克隆号 |
|---|
| C19L11 |
| 背景 |
|---|
AKT 是许多细胞通路中的核心蛋白，在细胞存活、增殖、葡萄糖摄取、代谢、血管生成以及对辐射和药物的反应中发挥着至关重要的作用。 AKT 存在三种亚型：AKT1、AKT2 和 AKT3，每种亚型具有不同的生理功能、特性和表达模式，具体取决于细胞类型。 AKT1，也称为 v-akt 鼠胸腺瘤病毒癌基因同源物 1，是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。 它的激活是通过丝氨酸 473 和苏氨酸 308 的磷酸化来实现的。AKT1 主要负责磷酸化和定位 CKDN1A（细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 1，也称为 p21）。 有趣的是，p21（一种通常存在于细胞核中的 CDK 抑制剂）经常被 AKT1 重新定位到细胞质。 p21 的这种由 AKT1 促进的细胞质定位在各种癌症中很常见，它通过抑制细胞凋亡所必需的蛋白质来促进肿瘤发生。 在多种癌症类型中观察到不同 AKT 同工型的表达升高。 具体来说，AKT1 水平升高与胃肠道间质瘤 (GIST)、甲状腺癌和乳腺癌有关，是预后不良的指标。 |
| 参考文献 |
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