Aldolase A Rabbit mAb
目录号: F0875
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Lane 1 : Hela
Lane 2 : 293
Lane 3 : PANC-1
Lane 4 : RD
Lane 5 : COS-7
Lane 6 : 3T3
Lane 7 : L929
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 40 kDa |
| 阳性对照 | Hela; 293; PANC-1; RD; COS-7; 3T3; L929 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 90min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
Aldolase A Rabbit mAb 可检测内源性总 Aldolase A 的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| ALDOA,Aldolase,Aldolase A |
| Uniprot ID |
|---|
| P04075 |
| 克隆号 |
|---|
| N4M1 |
| 背景 |
|---|
醛缩酶是参与糖酵解第四步的关键酶，它通过 C3-C4 键的醛缩裂解促进果糖-1,6-二磷酸可逆转化为甘油醛 3-磷酸和二羟基丙酮磷酸。该反应对于细胞内的 ATP 产生至关重要。有三种醛缩酶同工酶——A、B 和 C——在人类发育过程中表达不同。醛缩酶 A (ALDOA) 在大多数组织中表达，但在发育中的胚胎和成人肌肉组织中尤其丰富。除了在 ATP 生物合成中的主要作用外，ALDOA 还参与多种细胞功能，包括肌肉维持、细胞形状和运动调控、横纹肌收缩和肌动蛋白丝组织。值得注意的是，ALDOA 在各种癌症中高度表达，例如肺癌、肾癌和肝细胞癌。 |
| 参考文献 |
|---|
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