Alix Mouse mAb
目录号: F0219
-
Lane 1: Hela
Lane 2: A10
Lane 3: NIH/3T3
Lane 4: COS
操作要点
WB
蛋白定位
细胞连接; 细胞质; 细胞骨架; 细胞外环境
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Mouse |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 95 kDa |
| 阳性对照 | Hela; A10; NIH/3T3; COS |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤：
电泳分离
1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳；
2.电源调80V，30分钟。然后电源调（110V~150V），观察Marker，待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流不要太大，电流太大（超过150mA）会导致温度上升，影响跑胶结果。如无法避免大电流，可以对电泳槽冰浴来降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化PVDF膜1分钟，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；
4.电源200mA，100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。（注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节，电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好，但需要保持电转槽在低温的环境中，避免胶的融化。推荐不要超过250mA，120分钟。）
封闭(可选)
1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟；
2.在封闭液中孵育膜1小时,室温；
3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。
抗体孵育
1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液（一抗稀释比1: 1000）,4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；
2.用TBST洗膜3次,每次5分钟；
3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时；
4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
显色
1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀；
2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润)，置于显影仪中进行曝光。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
Alix Mouse mAb 用于检测内源性 Alix 总的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q8WUM4 |
| 克隆号 |
|---|
| A13D20 |
| 背景 |
|---|
Alix，也称为 Pdcd6ip 或 AIP1（凋亡相关基因 2 (ALG-2) 相互作用蛋白 1），是一种具有多面结构的支架蛋白。 它包含三个主要模块：N 端 Bro1 结构域、中央 V 形结构域和 C 端富含脯氨酸结构域 (PRD)。 然而，C 端 PRD 仍然知之甚少，而且高度无序。 PRD 是许多真核蛋白质中常见的模块。 Alix 主要与两个关键功能相关：首先，它与 ESCRT（运输所需的内体分选复合物）机器的组件相互作用，促进 ESCRTIII 的募集。 这种参与有助于各种细胞过程，例如内吞作用、膜受体的再循环、多泡体（MVB）和外泌体的形成、病毒出芽、胞质分裂和细胞膜修复。 其次，Alix 通过与 F-肌动蛋白和 F-肌动蛋白相互作用蛋白结合，在肌动蛋白细胞骨架重塑中发挥作用。 它的构象、与结合伙伴的相互作用以及活性受到翻译后修饰的调节，包括泛素化、磷酸化和棕榈酰化。 |
| 参考文献 |
|---|
技术支持
在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。
* 必填项
