Anti-PGK1 Rabbit mAb
目录号: F1626
客户使用Selleck的Anti-PGK1 Rabbit mAb发表文献1篇
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IF, FCM |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 45 kDa |
| 阳性对照 | human fetal brain; human fetal heart; mouse brain; mouse heart; mouse kidney; rat brain; rat heart; rat kidney; C6; RAW 264.7; PC-12; NIH/3T3; HeLa; HepG2; Jurkat |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 90min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
PGK1 Rabbit mAb 可检测内源性总 PGK1 的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P00558 |
| 克隆号 |
|---|
| D17A1 |
| 背景 |
|---|
磷酸甘油酸激酶 1 (PGK1) 是糖酵解中必不可少的酶，催化 1,3-双磷酸甘油酸 (1,3-BPG) 转化为 3-磷酸甘油酸 (3-PG) 并产生 ATP。从结构上看，PGK1 是一种单体蛋白，由两个 Rossmann 折叠结构域（N 端和 C 端）组成，通过铰链区连接，可实现底物结合和催化。除了在糖酵解中的作用外，PGK1 还参与血管生成、自噬、DNA 修复以及调控能量代谢、生物合成和氧化还原的平衡。PGK1 在生物体内普遍表达，其基因位于 X 染色体上，PGK1的缺乏与帕金森病、溶血性贫血和肌病等疾病有关。它在类风湿性关节炎中也存在过度表达的情况，与炎症和滑膜增生有关。 |
| 参考文献 |
|---|
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