Apaf-1 Rabbit mAb
目录号: F0671
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Lane 1: HeLa(transfected with 100 nM control siRNA)
Lane 2: HeLa (transfected with Apaf-1 siRNA)
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 135 Kda |
| 阳性对照 | Hela; THP-1; HEL; SH-SY5Y; |
|---|---|
| 阴性对照 | Hela (transfected with Apaf-1) |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 200mA 150min)。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光. |
生物描述
| 特异性 |
|---|
Apaf-1 Rabbit mAb识别内源性总Apaf-1蛋白。 |
| 别名 |
|---|
| APAF1 |
| Uniprot ID |
|---|
| O14727 |
| 克隆号 |
|---|
| K4H2 |
| 背景 |
|---|
APAF-1 也称为凋亡蛋白酶激活因子 1，是内在凋亡途径中的关键成分，这是一个受到高度调控的过程，对于维持细胞平衡至关重要。APAF-1还在激活胱天蛋白酶上发挥关键作用，胱天蛋白酶是通过裂解各种细胞蛋白来启动细胞凋亡的关键酶。这种激活发生在复杂的凋亡小体中，当 APAF-1 与细胞应激或损伤期间从线粒体释放的细胞色素 c 结合时形成。APAF-1 可作为评估细胞和组织凋亡活性的生物标志物。 APAF-1 与 HCA66 结合并调节 HCA66 中心体定位，参与中心体微管成核、纺锤体组装、细胞迁移和线粒体网络组织。除了其凋亡功能外，它还通过转位到细胞核并激活 Chk1 和细胞周期检查点在 DNA 损伤反应中发挥关键作用。 |
| 参考文献 |
|---|
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