ApoER2 Rabbit mAb
目录号: F2042
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Lane 1: Mouse brain
Lane 2: C6
Lane 3: Neuro-2a
操作要点
WB
蛋白定位
细胞膜; 内膜; 细胞外环境
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 106 kDa |
| 阳性对照 | Human fetal brain; Mouse brain; Mouse Fetal Brain; Rat Fetal Brain; HAP1; SH-SY5Y; C6; Neuro-2a |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 150min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
ApoER2 Rabbit mAb 可检测内源性总 ApoER2 的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q14114 |
| 克隆号 |
|---|
| K2M19 |
| 背景 |
|---|
载脂蛋白 E 受体 2 (apoER2) 由 lrp8 基因编码，是一种属于低密度脂蛋白受体 (LDLR) 家族的 I 型跨膜蛋白。ApoER2 在调控发育过程中的皮质分层、前神经元前体在喙部迁移流中的迁移以及成人大脑的学习和记忆方面起着关键作用。与其他 LDLR 家族成员不同，apoER2 在大脑中更为丰富，并且表现出高频率的可变剪接事件，尤其是在神经元中。从结构上讲，apoER2 是模块化的，各个外显子编码特定的功能域。它包含 LDLR 家族典型的五个功能域。人类载脂蛋白 E (ApoE) 有三种亚型：ApoE2、ApoE3 和 ApoE4，它们的区别在于 130 和 176 位上是否存在半胱氨酸和精氨酸残基。ApoE2 在两个位置上都有半胱氨酸，而 ApoE4 被认为是阿尔茨海默病 (AD) 的遗传风险因素。相反，ApoE2 具有神经保护作用，可将 AD 风险降低近 50%。ApoER2 对大脑中的神经元发育和突触可塑性至关重要，并且在盒式外显子剪接事件中富集，其中某些功能性外显子被排除在最终转录本之外。这些可变剪接事件影响 apoER2 功能，因为每个外显子倾向于编码不同的蛋白质功能域。 |
| 参考文献 |
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