Argonaute 3 Rabbit mAb
目录号: F1322
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Lane 1: PANC-1
Lane 2: HeLa
Lane 3: C2C12
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 97 kDa |
| 阳性对照 | PANC-1; HeLa; C2C12 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
Argonaute 3 Rabbit mAb 可检测内源性总 Argonaute 3 的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q9H9G7 |
| 克隆号 |
|---|
| K16F10 |
| 背景 |
|---|
Argonaute 蛋白属于一个高度保守的家族，该家族通过 RNA 干扰 (RNAi) 等途径在基因沉默中发挥关键作用。该家族分为 AGO 和 PIWI 蛋白，这两种蛋白都与长度为 21 至 35 个核苷酸的小 RNA 向导结合，然后指导特定基因的沉默。Argonaute-小 RNA 复合物可以抑制基因转录、诱导位点特异性切割或靶 mRNA 的一般降解，或抑制 mRNA 翻译成蛋白质。AGO 蛋白特异性地与长度约为 21 个核苷酸的小干扰 RNA (siRNA) 和 microRNA (miRNA) 结合。这些 siRNA 和 miRNA 由双链 RNA 前体通过 RNase III 酶（如 Dicer）加工而成。AGO 蛋白对于发育和分化至关重要，在许多植物和动物中，它们在保护细胞免受病毒感染方面发挥作用。在哺乳动物中，有四种 Argonaute 蛋白，其中 Argonaute 2 (Ago2) 是唯一具有切片内切酶活性的蛋白。这些蛋白有四个保守结构域：N 端、PAZ（结合小 RNA）、Mid 和 PIWI（提供催化功能）。除了基因沉默之外，Argonaute 蛋白还参与维持染色体完整性、帮助 siRNA 和 miRNA 成熟，并参与生成一类称为 Piwi 相互作用 RNA (piRNA) 的新型小非编码 RNA。 |
| 参考文献 |
|---|
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