ATP5G1/G2/G3 Rabbit mAb
目录号: F2807
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Hela
Lane 2: Mouse heart
Lane 3: Rat heart
操作要点
蛋白定位：内膜系统, 线粒体。
WB
建议使用 RIPA/NP-40 Lysis Buffer 制备裂解物。
建议一抗稀释比 1:10000-1:20000。
WB
建议使用 RIPA/NP-40 Lysis Buffer 制备裂解物。
建议一抗稀释比 1:10000-1:20000。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IHC |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
|
预测分子量
|
|---|
|
14 kDa, 33 kDa, 48 kDa
|
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 将细胞转移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声破碎，冰上静置裂解 30 min。冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:20000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
| ATP5G1/G2/G3 Rabbit mAb 用于检测内源性 ATP5G1/G2/G3 总的蛋白水平。 |
| 克隆号 |
|---|
| H11P10 |
| 背景 |
|---|
| ATP5G1、ATP5G2和ATP5G3基因编码ATP合酶F₀复合物的c、c'和c"亚基，对于线粒体生物能量学至关重要。这些亚基在通过F₁F₀ ATP合酶复合物驱动质子梯度合成ATP中发挥着关键作用。c亚基是F₀膜结构域的组成部分，形成一个转子环，将质子跨越线粒体内膜的转移与F₁结构域中的ATP生产耦合。ATP5G1（c）、ATP5G2（c'）和ATP5G3（c"）具有结构相似性，但表现出独特的特性，这可能有助于在不同组织或细胞条件下的功能冗余或特化作用。它们的活性对于ATP合成至关重要，并调节线粒体渗透转变（MPT）、线粒体断裂和在氧化应激或钙过载等压力条件下的细胞死亡通路。这些亚基的改变可能影响线粒体功能，导致与线粒体功能障碍相关的疾病，包括神经退行性疾病、缺血再灌注损伤和心脏功能障碍。 |
| 参考文献 |
|---|
技术支持
在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。
* 必填项
