CXCL12/SDF-1 mAb
目录号: F1523
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Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human tonsil tissue with F1523 at 1/100 dilution.
操作要点
蛋白定位：细胞外环境。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| IHC, IF, FCM |
| 抗体类型 |
|---|
| Mouse |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃ |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 10 kDa |
| 阳性对照 | Human PBMCs; Humn tonsil; HT1080 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| IF |
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实验步骤： 标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。
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| IHC |
|---|
实验步骤： 脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
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生物描述
| 特异性 |
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CXCL12/SDF-1 mAb 可检测内源性总 CXCL12/SDF-1 的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| SDF-1,CXCL12 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q6ICW0 |
| 克隆号 |
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| N2D21 |
| 背景 |
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CXCL12 也称为基质细胞衍生因子 1 (SDF-1)，是一种参与多种生理过程的趋化因子，包括胚胎发育、器官稳态、白细胞迁移、干细胞归巢、血管生成活性和癌细胞转移。它存在多种剪接变体中，主要是 SDF-1α 和 SDF-1β、SDF-1γ，在神经系统中表达。CXCL12 形成单体-二聚体平衡，在结晶或与其受体 CXCR4 结合后转向二聚体。CXCR4 是 CXCL12 的主要受体，对胎儿发育至关重要，并作为 T 嗜性 HIV-1 的辅助受体，CXCL12 可抑制病毒进入。 CXCL12 表达在缺血条件下（例如心脏和骨骼肌）上调，在心肌梗塞后具有保护作用，使其成为抗缺血疗法的潜在靶点。在癌症中，CXCL12/CXCR4 信号传导促进癌细胞迁移和转移， CXCR4 抑制可减少肿瘤转移。 |
| 参考文献 |
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