Cyclin D2 Rabbit mAb
目录号: F0376
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Lane 1: U-2OS
Lane 2: ACHN
Lane 3: RD
Lane 4: YB2/0
Lane 5: 293
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质; 内膜; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 31 kda |
| 阳性对照 | U-2 OS; ACHIN; RD; YB2/0 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 150mA 90min)。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
Cyclin D2 Rabbit mAb检测内源性总Cyclin D2蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P30279 |
| 克隆号 |
|---|
| E19L24 |
| 背景 |
|---|
细胞周期蛋白依赖性激酶 CDK4 和 CDK6 的活性受 T 环磷酸化、其细胞周期蛋白伴侣（D 型细胞周期蛋白）的可用性以及与 Cip/Kip 或 INK 蛋白家族的 CDK 抑制剂的相互作用控制。无活性的细胞周期蛋白 D/CDK4 和 p27 Kip1 三元复合物需要细胞外有丝分裂信号来释放和降解 p27，同时需要细胞周期蛋白 D 水平的增加，以便通过限制点并依赖 Rb 进入 S 期。活性细胞周期蛋白 D/CDK4 复合物磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白，从而释放 E2F 转录因子，从而启动 G1/S 期基因表达。 |
| 参考文献 |
|---|
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