EAAT1 Rabbit mAb
目录号: F0777
操作要点
WB
蛋白定位
细胞膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
|---|
| IF |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 58 kDa |
| 阳性对照 | Rat brain; SW837 |
|---|---|
| 阴性对照 | A549 |
实验方法
| IF |
|---|
实验步骤： 标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
EAAT1 Rabbit mAb 可检测内源性 EAAT1 总的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| EAAT1,GLAST-1/SLC1A3 |
| Uniprot ID |
|---|
| P43003 |
| 克隆号 |
|---|
| E21K7 |
| 背景 |
|---|
谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统中的主要兴奋性神经递质，但该系统的长期激活会导致神经损伤和细胞死亡。从突触前神经元和突触传递释放后，谷氨酸通过跨膜谷氨酸转运体被重新吸收到突触前神经元或邻近的神经胶质细胞中。其中，兴奋性氨基酸转运体 (EAAT) 1 和 EAAT2 是 Na+ 依赖性转运体，主要在中枢神经系统的神经胶质细胞中表达。它们通过防止过量的谷氨酸溢出突触间隙，在调控谷氨酸能兴奋性方面发挥着至关重要的作用。这一功能是由它们结合和运输谷氨酸到星形胶质细胞和小胶质细胞的能力促成的。EAAT1 和 EAAT2 的活性在多个层面受到严格调控，包括基因表达、转录后剪接、糖基化和细胞表面运输。虽然EAAT2 在神经传递中更为丰富且研究得更为透彻，而 EAAT1 的具体作用仍不太清楚。然而，已知 EAAT1 表达会随着培养的原代星形胶质细胞培养基中谷氨酸浓度升高而增加，这表明这种谷氨酸转运蛋白可能具有额外的重要意义。值得注意的是，EAAT1 在缺血事件后显示出神经保护潜力，因为反应性星形胶质细胞和活化的小胶质细胞在这种情况下主要表达 EAAT1 而不是 EAAT2。 |
| 参考文献 |
|---|
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