FMRP Rabbit mAb
目录号: F1373
操作要点
WB
蛋白定位
细胞膜; 细胞突起; 着丝粒; 染色体; 细胞质; 内膜; 细胞核; 突触后膜; 突触
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IF |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 80 kDa |
| 阳性对照 | COS-7; Hela; C2C12 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
| IF |
|---|
实验步骤：
标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
FMRP Rabbit mAb 可检测内源性总 FMRP 的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| FMRP,Fragile X Mental Retardation Protein |
| Uniprot ID |
|---|
| Q06787 |
| 克隆号 |
|---|
| D18E17 |
| 背景 |
|---|
脆性 X 智力低下蛋白 (FMRP) 是一种由 FMR1 基因编码的 RNA 结合蛋白，主要在大脑中表达。它作为活动依赖性神经发育的主要调控器发挥作用，无效突变体表现出过度兴奋和活动依赖性突触成熟、细化和可塑性的调控降低。FMRP 作为特定 mRNA 的翻译抑制因子发挥作用，并在 mRNA 编辑、前 mRNA 剪接和 microRNA 通路中发挥作用。除了其细胞质作用外，FMRP 还结合细胞核中的染色质，影响基因组稳定性和 DNA 损伤反应。由于 FMR1 基因中的三核苷酸重复扩增导致 FMRP 丢失，导致脆性 X 综合征 (FXS)，从而导致智力障碍和自闭症谱系障碍。了解 FMRP 的功能和机制对于制定 FXS 和相关疾病的治疗策略至关重要。 |
| 参考文献 |
|---|
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