Glutaminase Rabbit mAb
目录号: F1632
操作要点
WB
蛋白定位
线粒体; 细胞质
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 73 kDa |
| 阳性对照 | human kidney; human glioma; HAP1; HeLa; HEK293 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
Glutaminase Rabbit mAb可检测内源性总谷氨酰胺酶(Glutaminase)总的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| Glutaminase,Glutaminase-1/GLS1 |
| Uniprot ID |
|---|
| O94925, O94925-3 |
| 克隆号 |
|---|
| D8D1 |
| 背景 |
|---|
谷氨酰胺酶(Glutaminase)是一种催化谷氨酰胺转化为谷氨酸的酶，这是谷氨酰胺分解过程中的第一步和限速步骤。在哺乳动物中，有两种类型的谷氨酰胺酶：肾型谷氨酰胺酶 (GLS1) 和肝型谷氨酰胺酶 (GLS2)。GLS1 对于谷胱甘肽的合成尤为重要，谷胱甘肽在维持氧化还原平衡方面起着关键作用。GLS1 的这一功能通过帮助骨细胞适应骨缺损部位的缺氧和缺血条件来支持骨细胞在植入后的存活。 |
| 参考文献 |
|---|
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