GRK6 Rabbit mAb
目录号: F1509
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Lane 1: 293T
Lane 2: MCF7
Lane 3: DLD-1
Lane 4: U-2 OS
操作要点
WB
蛋白定位
内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 70 kDa |
| 阳性对照 | 293T; DLD-1; U-2 OS; MCF7 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
GRK6 Rabbit mAb 可检测内源性 GRK6 总的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P43250 |
| 克隆号 |
|---|
| A16N13 |
| 背景 |
|---|
G 蛋白偶联受体激酶 6 (GRK6) 是一种调控 G 蛋白偶联受体 (GPCR) 的重要酶，特别是影响其在各种细胞环境中的磷酸化、脱敏和内化。它主要在免疫组织中表达，并调控对炎症、趋化性和疼痛反应至关重要的信号通路。它通过调控趋化因子受体的活性和影响细胞因子信号传导，在类风湿性关节炎和炎症性肠病等多种炎症疾病中发挥关键作用。它与包括 NFκB 在内的各种细胞内通路相互作用，影响免疫细胞的转录调控。它还维持造血干细胞的自我更新并调控活性氧信号传导。 |
| 参考文献 |
|---|
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