KIF3A Rabbit mAb
目录号: F1414
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Lane 1: Hela
Lane 2: SH-SY5Y
Lane 3: U-2 OS
Lane 4: MDA-MB-435
操作要点
WB
蛋白定位
细胞突起; 纤毛; 细胞质; 细胞骨架; 微管
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 80 kDa |
| 阳性对照 | HeLa; U-2 OS; MDA-MB-435 |
|---|---|
| 阴性对照 |
样品处理数据示例
| 样品 | 处理情况 | ||||
| SH-SY5Y | Low expression | ||||
| 点击查看更多样品数据 | |||||
*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜(湿转法参考条件: 200mA 120min)。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
KIF3A Rabbit mAb识别内源性KIF3A总蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q9Y496 |
| 克隆号 |
|---|
| H4E10 |
| 背景 |
|---|
驱动蛋白家族成员 3A (KIF3A) 是驱动蛋白-2 家族中一种微管导向运动蛋白，对细胞内运输和微管运动至关重要。KIF3A 在减数分裂期间与微管相关，其耗竭会导致卵母细胞成熟缺陷，激活纺锤体组装检查点并导致中期 I 停滞。它通过与 KIFC1 相互作用来调节纺锤体极组织，并影响 NuMA 和 γ-微管蛋白的表达和定位。由于组蛋白去乙酰化酶 6 (HDAC6) 的去乙酰化改变，KIF3A 敲低降低了微管稳定性。它对卵母细胞中线粒体、高尔基体和内质网的分布和功能至关重要，并在精子发生和纤毛的形成和维持中起关键作用。 |
| 参考文献 |
|---|
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