LAMTOR3/MAPKSP1 Rabbit mAb
目录号: F1438
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Lane 1: MCF7
Lane 2: mIMCD-3
Lane 3: Vero
Lane 4: AR42J
Lane 5: RD
Lane 6: COS-7
操作要点
WB
蛋白定位
胞内体; 内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 14 kDa |
| 阳性对照 | MCF-7; mIMCD-3; Vero; AR42J; RD; COS-7 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜(湿转法参考条件: 150mA 50min)。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
LAMTOR3/MAPKSP1 Rabbit mAb识别内源性LAMTOR3/MAPKSP1总蛋白水平。该抗体可与LAMTOR1/C11orf59和LAMTOR2/ROBLD3发生交叉反应。 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q9UHA4 |
| 克隆号 |
|---|
| L7A16 |
| 背景 |
|---|
LAMTOR3（晚期内体/溶酶体衔接子和 MAPK 和 MTOR 激活剂 3），也称为 MAPKSP1，是一种参与肿瘤发生和发展的路障域亚基。它在有丝分裂后期充当细胞核中的支架蛋白复合物，并通过与聚合丝裂原活化蛋白激酶 MAPK1/ERK2 相互作用在各种癌症中发挥关键作用。LAMTOR3 促进肿瘤细胞生长和有丝分裂，并通过诱导 BCL-2 与肺癌化疗耐药性有关。此外，PCNA 相关因子 (PAF) 通过 LAMTOR3 表达和 MAPK 通路激活增强胰腺癌细胞增殖。LAMTOR3 还调节细胞凋亡，并具有作为重要分子标记的潜力。氨基酸诱导 mTORC1 移动到溶酶体膜，Rag 蛋白就位于该膜上。由 MAPKSP1、ROBLD3 和 c11orf59 基因编码的 Ragulator 复合物与 Rag GTPases 相互作用，将它们募集到溶酶体，对 mTORC1 激活至关重要。 |
| 参考文献 |
|---|
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