MFF Rabbit mAb
目录号: F2355
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Lane 1: Fetal muscle
Lane 2: Fetal heart
操作要点
WB
蛋白定位
胞质囊泡; 内膜; 线粒体; 线粒体外膜; 过氧化物酶体; 突触
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 39 kDa |
| 阳性对照 | Fetal muscle; Fetal heart |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 90min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
MFF Rabbit mAb 可检测内源性 MFF 总的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q9GZY8 |
| 克隆号 |
|---|
| N5C24 |
| 背景 |
|---|
线粒体裂变因子 (MFF) 是一种尾锚定膜蛋白，对线粒体和过氧化物酶体的分裂都至关重要。MFF 作为一种衔接蛋白，将动力蛋白相关蛋白 1 (DRP1) 募集到这些细胞器的外膜，促进膜收缩和裂变。它与其他蛋白质（如 FIS1 和 PEX11β）共同协调过氧化物酶体分裂，并与线粒体特异性蛋白质（如 MiD49 和 MiD51）相互作用，这些蛋白质也可以独立招募 DRP1。MFF 或 DRP1 的突变或缺失会损害裂变，导致细胞器损伤、功能失调。MFF 似乎还可以通过响应细胞信号来调控线粒体的收缩，既是裂变过程的传感因子，也是诱导因子。 |
| 参考文献 |
|---|
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