Myosin Light Chain 2 Rabbit mAb
目录号: F0485
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Lane 1: C2C12
Lane 2: A431
Lane 3: T24
Lane 4: 293T
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质；细胞骨架
建议使用 Tris-Triton 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 18 kda |
| 阳性对照 | C2C12; A431; T24 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 150mA 50min)。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
Myosin Light Chain 2 Rabbit mAb识别内源性的总Myosin Light Chain 2蛋白。 |
| 别名 |
|---|
| MYL9,Myosin Light Chain 2 |
| Uniprot ID |
|---|
| P24844 |
| 克隆号 |
|---|
| J14M12 |
| 背景 |
|---|
肌球蛋白由六条多肽链组成：两条相同的重链和两对轻链。肌球蛋白轻链 2 (MLC2)，也称为肌球蛋白调节轻链 (MRLC)、RLC 或 LC20，根据其分布有几种亚型。肌球蛋白轻链 2 (MYL2，也称为 MLC-2) 是一种 ∼19 kDa 肌节蛋白，属于 EF-手钙结合蛋白超家族，在哺乳动物横纹肌中以三种主要亚型存在，由三种不同的基因编码。这些亚型是：MLC-2f（快肌收缩骨骼亚型）、MLC-2v（心室和慢肌收缩骨骼亚型）和 MLC-2a（心房亚型），每种亚型在哺乳动物中都有独特的发育表达模式。在平滑肌中，MLC2 在 Thr18 和 Ser19 位点被肌球蛋白轻链激酶 (MLCK) 以 Ca2+/钙调蛋白依赖性方式磷酸化，这与肌球蛋白 ATPase 活性和平滑肌收缩有关。 |
| 参考文献 |
|---|
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