PARP Rabbit mAb

目录号: F0148

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    客户使用Selleck的PARP Rabbit mAb发表文献3

    操作要点

    WB
    蛋白定位
    染色体; 细胞质; 细胞核
    建议使用 RIPA/NP-40 裂解。

    使用信息

    稀释比例
    1: 1000
    1:200
    抗体应用
    WB, IP, eCLIP
    抗体类型
    Rabbit
    反应性
    Human, Mouse, Rat, Monkey
    储存液配方
    PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
    储存条件(自收到货起)
    –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
    预测分子量
    116 kDa, 89 kDa
    阳性对照 HEK293; THP-1; SW620; A20; Jurkat (Etoposide, 25µM, 5h)
    阴性对照

    样品处理数据示例

    样品 处理情况
    Jurkat Etoposide (25 µM, 5 h)
    点击查看更多样品数据

    *该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考:http://www.proteinatlas.org

    实验方法

    WB
    实验步骤:
     
    电泳分离
    1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳;
    2.电源调80V,30分钟。然后电源调(110V~150V),观察Marker,待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后,即可停止电泳。(注意电泳时电流不要太大,电流太大(超过150mA)会导致温度上升,影响跑胶结果。如无法避免大电流,可以对电泳槽冰浴来降温。)
     
    转膜
    1.拿出电转槽,把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中;
    2.用甲醇活化PVDF膜1分钟,用转移缓冲液冲洗;
    3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好;
    4.电源200mA,100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。(注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节,电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好,但需要保持电转槽在低温的环境中,避免胶的融化。推荐不要超过250mA,120分钟。)
     
    封闭(可选)
    1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟;
    2.在封闭液中孵育膜1小时,室温;
    3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。
     
     抗体孵育
    1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液(一抗稀释比1: 1000),4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜;
    2.用TBST洗膜3次,每次5分钟;
    3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时;
    4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
    显色
    1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀;
    2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润),置于显影仪中进行曝光。
     

    Datasheet & SDS

    生物描述

    特异性

    PARP Rabbit mAb 用于检测内源性 PARP 总的蛋白水平。

    别名
    PARP,PARP1
    Uniprot ID
    P09874
    克隆号
    N4A5
    背景

    聚(ADP-核糖)聚合酶(The poly(ADP-ribose) polymerases, PARP)代表了一个新兴的酶家族,具有催化 ADP-核糖向靶蛋白转移的共同能力,这一过程称为聚 ADP-核糖基化。 该酶家族包含至少 18 个由不同基因编码的成员,所有成员在保守的催化结构域中具有同源性。 PARP 在多种细胞过程中发挥着关键作用,包括 DNA 修复、转录调控和染色质结构调节。 具体来说,PARP 在核苷酸切除修复 (NER) 和碱基切除修复 (BER) 中至关重要,有助于修复烷化剂和某些化疗药物引起的 DNA 损伤。 在某些癌症中观察到 PARP 上调,例如三阴性乳腺癌 (TNBC) 和表达 BRCA1 突变的癌症。 因此,抑制 PARP 可能是有益的,特别是与化疗联合使用,因为它可以选择性地使癌细胞对 DNA 损伤剂敏感并诱导肿瘤细胞死亡。

    参考文献

    技术支持

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