PARP Rabbit mAb
目录号: F0148
操作要点
WB
蛋白定位
染色体; 细胞质; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP, eCLIP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 116 kDa, 89 kDa |
| 阳性对照 | HEK293; THP-1; SW620; A20; Jurkat (Etoposide, 25µM, 5h) |
|---|---|
| 阴性对照 |
客户使用Selleck的发表文献3篇
样品处理数据示例
| 样品 | 处理情况 | ||||
| Jurkat | Etoposide (25 µM, 5 h) | ||||
| 点击查看更多样品数据 | |||||
*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤：
电泳分离
1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳；
2.电源调80V，30分钟。然后电源调（110V~150V），观察Marker，待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流不要太大，电流太大（超过150mA）会导致温度上升，影响跑胶结果。如无法避免大电流，可以对电泳槽冰浴来降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化PVDF膜1分钟，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；
4.电源200mA，100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。（注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节，电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好，但需要保持电转槽在低温的环境中，避免胶的融化。推荐不要超过250mA，120分钟。）
封闭(可选)
1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟；
2.在封闭液中孵育膜1小时,室温；
3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。
抗体孵育
1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液（一抗稀释比1: 1000）,4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；
2.用TBST洗膜3次,每次5分钟；
3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时；
4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
显色
1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀；
2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润)，置于显影仪中进行曝光。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
PARP Rabbit mAb 用于检测内源性 PARP 总的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| PARP,PARP1 |
| Uniprot ID |
|---|
| P09874 |
| 克隆号 |
|---|
| N4A5 |
| 背景 |
|---|
聚（ADP-核糖）聚合酶（The poly(ADP-ribose) polymerases, PARP）代表了一个新兴的酶家族，具有催化 ADP-核糖向靶蛋白转移的共同能力，这一过程称为聚 ADP-核糖基化。 该酶家族包含至少 18 个由不同基因编码的成员，所有成员在保守的催化结构域中具有同源性。 PARP 在多种细胞过程中发挥着关键作用，包括 DNA 修复、转录调控和染色质结构调节。 具体来说，PARP 在核苷酸切除修复 (NER) 和碱基切除修复 (BER) 中至关重要，有助于修复烷化剂和某些化疗药物引起的 DNA 损伤。 在某些癌症中观察到 PARP 上调，例如三阴性乳腺癌 (TNBC) 和表达 BRCA1 突变的癌症。 因此，抑制 PARP 可能是有益的，特别是与化疗联合使用，因为它可以选择性地使癌细胞对 DNA 损伤剂敏感并诱导肿瘤细胞死亡。 |
| 参考文献 |
|---|
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