PAX5 Rabbit mAb

目录号: F1006

抗体应用: 反应性:
规格 价格 库存 购买数量
20uL 790 现货
50uL 1240 现货
100uL 1990 现货
100uL*2 3790 现货
 

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使用信息

稀释比例
1:5000
1:20
1:5000
1:250
1:30
1:40
抗体应用
WB, IP, IHC, IF, F, ChIP
反应性
Human, Mouse, Rat
抗体类型
Rabbit
储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
预测分子量
29 kDa, 42 kDa

实验方法

WB
实验步骤:
 
样品制备
1. 组织样品:破碎组织,加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer (含蛋白酶抑制剂Cocktail),低温匀浆或置于冰上超声裂解样品,静置30 min。
2. 贴壁细胞样品:吸去培养基, 将细胞转移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer (含蛋白酶抑制剂Cocktail),超声破碎,冰上静置裂解 30 min。冰上静置裂解 5 min。
3. 悬浮细胞样品:将培养基转移至离心管中离心,弃上清,用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer (含蛋白酶抑制剂Cocktail),冰上静置裂解 5 min。
4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min,收集上清液;
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度;
6. 加入蛋白上样缓冲液,将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min,冰上静置冷却后离心 5 min。
 
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度,将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶(即下层胶)浓度:10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表
2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V,观察 Marker,待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后,即可停止电泳。(注意电泳时电流切勿过大,如超过 150 mA 会导致温度上升,容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流,可对电泳槽使用冰浴降温。)
 
转膜
1.拿出电转槽,把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中;
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min,用转移缓冲液冲洗;
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好;
4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。(推荐采用 0.45 µm PVDF 膜) PVDF 膜孔径规格选择参照表
湿转法参考条件:200 mA, 120 min
(注意电转条件可根据蛋白大小适当调节,分子量大的蛋白适宜采用大电流,并延长转膜时间,但需要确保电转槽始终处于低温的环境中,避免凝胶融化。)
 
封闭
1. 电转移后,室温下用 TBST 洗膜 5 min;
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h,室温;
3. 用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min。
 
抗体孵育
1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液(建议一抗稀释比 1:5000),4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜;
2. 用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min;
3. 在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h;
4. 孵育结束后,用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min。
 
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀;
2. 与膜孵育1 min,去除多余底物(需保持膜湿润),置于显影仪中进行曝光。
 

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
PAX5 Rabbit mAb 用于检测内源性 PAX5 总的蛋白水平。
别名
Atg13,KIAA0652
克隆号
M18F13
背景
PAX5(成对盒基因5)是B细胞发育的主转录因子,具有用于DNA结合的成对结构域、用于基因调控的转激活结构域和参与细胞过程的C端区域。PAX5通过激活B细胞特异性的基因如CD19、BLNK和CD79a,同时抑制非B细胞基因如NOTCH1和M-CSFR来驱动B细胞谱系的承诺,以维持B细胞身份。它招募染色质重塑因子和基础转录机械,包括RNA聚合酶II和TBP,以协调基因表达。在B-ALL中,PAX5的突变或缺失会破坏分化,通常与IKZF1和RUNX1等基因的改变共同作用,促进白血病的发生。PAX5的部分失活影响PTEN的调节,减少成熟B细胞中PI3K-AKT信号通路的活性,并与ETV6-RUNX1等致癌驱动因子协同作用,导致黏附和免疫反应基因的变化。它还在远端V(D)J重排过程中Igh位点的收缩中起着关键作用,通过如H3K36me2等组蛋白修饰确保抗体多样性。
参考文献

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