PC Rabbit mAb

目录号: F1491

    抗体应用: 反应性:
    规格 价格 库存 购买数量
    20uL 790 现货
    50uL 1240 现货
    100uL 1990 现货
    100uL*2 3790 现货
     

    400-668-6834

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    操作要点

    蛋白定位:胞质囊泡, 细胞外环境
    WB
    建议使用 RIPA/NP-40 Lysis Buffer 制备裂解物。

    使用信息

    稀释比例
    1:1000
    1:50
    1:3200
    1:800
    抗体应用
    WB, IP, IHC, IF
    反应性
    Human, Mouse, Rat
    抗体类型
    Rabbit
    储存液配方
    PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
    储存条件(自收到货起)
    -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
    预测分子量
    65-75 kDa

    实验方法

    WB
    实验步骤:
     
    样品制备
    1. 组织样品:破碎组织,加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含蛋白酶抑制剂Cocktail),低温匀浆或置于冰上超声裂解样品,静置30 min。
    2. 贴壁细胞样品:吸去培养基, 将细胞转移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含蛋白酶抑制剂Cocktail),超声破碎,冰上静置裂解 30 min。冰上静置裂解 5 min。
    3. 悬浮细胞样品:将培养基转移至离心管中离心,弃上清,用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含蛋白酶抑制剂Cocktail),冰上静置裂解 5 min。
    4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min,收集上清液;
    5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度;
    6. 加入蛋白上样缓冲液,将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min,冰上静置冷却后离心 5 min。
     
    电泳分离
    1. 根据所提蛋白的浓度,将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶(即下层胶)浓度:10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表
    2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V,观察 Marker,待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后,即可停止电泳。(注意电泳时电流切勿过大,如超过 150 mA 会导致温度上升,容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流,可对电泳槽使用冰浴降温。)
     
    转膜
    1.拿出电转槽,把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中;
    2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min,用转移缓冲液冲洗;
    3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好;
    4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。(推荐采用 0.45 µm PVDF 膜) PVDF 膜孔径规格选择参照表
    湿转法参考条件:200 mA, 120 min
    (注意电转条件可根据蛋白大小适当调节,分子量大的蛋白适宜采用大电流,并延长转膜时间,但需要确保电转槽始终处于低温的环境中,避免凝胶融化。)
     
    封闭
    1. 电转移后,室温下用 TBST 洗膜 5 min;
    2. 在封闭液中将膜孵育 1 h,室温;
    3. 用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min。
     
    抗体孵育
    1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液(建议一抗稀释比 1:1000),4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜;
    2. 用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min;
    3. 在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h;
    4. 孵育结束后,用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min。
     
    显色
    1. 加入配制好的 ECL 发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀;
    2. 与膜孵育1 min,去除多余底物(需保持膜湿润),置于显影仪中进行曝光。
     

    Datasheet & SDS

    生物描述

    特异性
    PC Rabbit mAb 用于检测内源性 PC 总的蛋白水平。
    别名
    PAX5
    克隆号
    B18K17
    背景
    前体蛋白转化酶(PCs)是九种丝氨酸蛋白酶的家族,负责通过特定的蛋白水解切割激活前体蛋白,从而促进多种生物学过程。这些酶包括furin、PC1/3、PC2、PC5/6和PCSK9,具有共同的结构,包括用于分泌的信号肽、一个自我切割的前结构域、一个含有Asp-His-Ser三联体的催化结构域、一个用于pH/钙稳定性的P结构域以及一个用于膜相互作用的C端结构域。它们根据不同的基序切割底物,其中基本氨基酸特异性的PCs(如furin)靶向(R/K)Xn(R/K)↓序列,而非基本PCs(如SKI-1/S1P)则识别RX(L/V/I)X↓。PCs在激素成熟(如胰岛素、胰高血糖素)、免疫调节(如激活TGF-β、IL-6、Foxp3在Tregs中的作用)和肿瘤进展(如处理VEGF、整合素和MMPs)中至关重要。它们还在病毒进入(如SARS-CoV-2刺突蛋白的切割)和胆固醇调节(通过PCSK9)中发挥作用。PCs在分泌途径中操作,自激活并以pH/钙依赖的方式切割底物,从而确保精确的蛋白成熟。PCs的失调与高胆固醇血症、癌症转移和病毒感染等疾病相关。
    参考文献

    技术支持

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