Phospho-β-Catenin (Ser 552) Rabbit mAb
目录号: F0494
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Lane 1: SK-N-MC
Lane 2: SK-N-MC (λ phosphatase-treated)
Lane 3: NTERA-2
Lane 4: NTERA-2 (λ phosphatase-treated)
操作要点
WB
蛋白定位
细胞连接；细胞膜；细胞突起；细胞质；细胞骨架
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 92 kDa |
| 阳性对照 | SK-N-MC; NTERA-2 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
仅当 Ser552 位点发生磷酸化时，Phospho-β-Catenin (Ser 552) Rabbit mAb 才可检测内源性总 Phospho--Catenin (Ser552) 的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P35222 |
| 克隆号 |
|---|
| K9A16 |
| 背景 |
|---|
β-Catenin 对于 Wnt 信号通路内的细胞黏附和转录调控至关重要，显著影响非小细胞肺癌 (NSCLC) 中的肿瘤进展和易位。当 β-Catenin 未被磷酸化时，它会被降解；然而，Ser552 等位点的磷酸化会增加其稳定性，使其能够移动到细胞核并激活负责上皮-间充质转化 (EMT) 和侵袭的基因。这种磷酸化通过增加 EMT 相关因子（如 Slug）的表达在易位中起着关键作用，这会增强肿瘤细胞的移动性并导致更具侵袭性的肿瘤和更糟糕的结果。 |
| 参考文献 |
|---|
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