Phospho-Connexin 43 (Ser368) Rabbit mAb
目录号: F1346
操作要点
WB
蛋白定位
细胞连接; 细胞膜; 内质网; 内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 42, 44, 46 kDa |
| 阳性对照 | SNB19 (TPA, 200 nM, 30 min); C2C12 (TPA, 200 nM, 30 min) |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
" Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
仅当 Ser368 磷酸化时 Phospho-Connexin 43 (Ser368) Rabbit mAb才 可检测内源性总 Connexin 43 的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| Connexin 43 / GJA1 (phospho S368),Phospho-Connexin 43 (Ser368) |
| Uniprot ID |
|---|
| P17302 |
| 克隆号 |
|---|
| J12F20 |
| 背景 |
|---|
连接蛋白 43 (Cx43) 是一种关键的间隙连接蛋白，对细胞间通讯至关重要，可使小分子和信号信使在细胞之间传递。它在心脏和大脑中大量表达，特别是在心室和星形胶质细胞组织中。Cx43 在其 C 末端尾部的磷酸化，包括 Ser368 等位点，由蛋白激酶 C (PKC) 调控间隙连接和半通道的通透性。Ser368 处的磷酸化会诱导 Cx43 的构象变化，从而影响其稳定性、定位和与参与间隙连接通讯的其他蛋白质的相互作用。这种修饰会影响通道电导率和选择性通透性，在心血管和神经系统功能中发挥着至关重要的作用。 |
| 参考文献 |
|---|
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