Phospho-FoxO1 (Ser256) Rabbit mAb
目录号: F0800
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Lane 1: 293T
Lane 2: 293T (phosphatase-treated)
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 82 kDa |
| 阳性对照 | 293T; C2C12 (insulin, 100 nM, 15 min) |
|---|---|
| 阴性对照 | 293T (phosphatase-treated) |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
仅当 FoxO1 Ser256 位点磷酸化时 Phospho-FoxO1 (Ser256) Rabbit mAb 才可检测内源性 Phospho-FoxO1 总的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| FOXO1A (phospho S256),Phospho-FoxO1 (Ser256) |
| Uniprot ID |
|---|
| Q12778 |
| 克隆号 |
|---|
| E12L24 |
| 背景 |
|---|
FOXO1 又称 FKHR（横纹肌肉瘤中的叉头转录因子），是叉头转录因子 O 类 (FoxO) 亚家族的成员。人类中的该家族还包括 FOXO3a、FOXO4 和 FOXO6。FOXO1 最初是通过与人类肺泡横纹肌肉瘤 (ARMS) 中的 PAX3 和 PAX7 基因融合而发现的。FOXO1 蛋白由四个调控其活性的关键功能域组成：高度保守的叉头 (FKH) 域，也称为 DNA 结合域 (DBD)、DBD COOH 末端碱性区域中的核定位信号 (NLS)、位于 DBD 下游的核输出序列 (NES) 和 COOH 末端转录激活域 (TAD)。作为 FoxO 家族的创始成员，FOXO1 与多种人类疾病有关，包括癌症和糖尿病。 Akt 通过对 Thr24、Ser256 和 Ser319 位点的叉头转录因子进行磷酸化，使其失活，导致其核输出和转录活性的抑制，从而导致细胞增殖增加。 |
| 参考文献 |
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