Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1387) Rabbit mAb
目录号: F1948
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Lane 1: 293T
Lane 2: 293T (phosphatase-treated)
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质; 溶酶体; 内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 200 kDa |
| 阳性对照 | 293T; MEF |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
仅当 Ser1387 磷酸化时 Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1387) Rabbit mAb 才可检测内源性总 Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1387) 的蛋白水平。该抗体可能与某未知的 140 kD 蛋白质发生交叉反应。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P49815 |
| 克隆号 |
|---|
| B6D9 |
| 背景 |
|---|
磷酸化-Tuberin/TSC2 (Ser1387) 是指由 TSC2 基因编码的 tuberin 蛋白 (TSC2) 上丝氨酸 1387 的磷酸化。这种磷酸化对于调控雷帕霉素复合物 1 (mTORC1) 信号通路的机制靶点至关重要。Ser1387 位于 TSC2 的 C 末端区域，被 AMP 活化蛋白激酶 (AMPK) 磷酸化，从而激活 TSC2 并增强其作为 RHEB 的 GTPase 活化蛋白 (GAP) 的作用，从而抑制 mTORC1。这种调控对于控制细胞生长、增殖和代谢至关重要。此外，Ser1387 处的磷酸化使 TSC2 被糖原合酶激酶 3β (GSK3β) 进一步磷酸化，从而影响其功能和相互作用。 |
| 参考文献 |
|---|
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