PKC ζ Rabbit mAb
目录号: F0745
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Lane 1: 293T
Lane 2: PC-12
Lane 3: COS
操作要点
WB
蛋白定位
细胞连接; 细胞质; 胞内体; 内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 78 kDa |
| 阳性对照 | 293; NBT-II; PC12; COS |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
PKC ζ Rabbit mAb 可检测内源性 PKCζ 总的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| PKC zeta,PKC ζ |
| Uniprot ID |
|---|
| Q05513 |
| 克隆号 |
|---|
| J7H1 |
| 背景 |
|---|
蛋白激酶 C (PKC) 代表丝氨酸/苏氨酸激酶家族，最初被鉴定为细胞受体。PKC 同工酶广泛表达于各种人类细胞类型，每种同工酶被认为发挥独特的、不重叠的作用。PKC 家族根据其第二信使依赖性分为三类：经典 (α、β、γ)、新型 (δ、ε、η、θ) 和非典型 (ζ、λ、ι、μ)。与经典和新型 PKC 不同，非典型 PKC (aPKC) 不需要钙或二酰甘油来激活。这些 aPKC 参与调控细胞极性、分化、迁移和增殖。所有三个 PKC 组都有一个伪底物或自抑制结构域，该结构域与催化结构域的底物结合区域相互作用，在没有特定辅因子或激活因子的情况下抑制活化。PKC 活性受到三个关键因素的严格控制磷酸化事件：活化环中 Thr500 处的磷酸化、Thr641 处的自磷酸化以及羧基末端疏水位点 Ser660 处的磷酸化。此外，aPKC 在各种癌症的进展和转移中起着至关重要的作用，影响患者的生存结果。 |
| 参考文献 |
|---|
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