RBL2 Rabbit mAb

目录号: F1961

Lane 1: HT29
Lane 2: C2C12
Lane 3: Vero

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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操作要点

WB
蛋白定位
细胞核
建议使用 RIPA/核裂解液裂解。

使用信息

稀释比例
WB1:1000 IP1:100 CHIP1:50

抗体应用
WB, IP, ChIP

抗体类型
Rabbit

反应性
" Human, Mouse, Rat, Monkey"

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
130 kDa

阳性对照	HT-29; C2C12; H-4-II-E; 293; 3T3
阴性对照	293 (transfected with 100 nM RBL2 siRNA I)

样品处理数据示例

样品	处理情况
Vero	Low expression
293	Tansfection (100 nM RBL2 siRNA I)
点击查看更多样品数据

^*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org

样品	处理情况

实验方法

WB
Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 150min) 膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 150min)

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
RBL2 Rabbit mAb 可检测内源性总 RBL2 的蛋白水平。该抗体不会与 Rb 或 RBL1 蛋白发生交叉反应。

Uniprot ID
Q08999

克隆号
G2F19

背景
视网膜母细胞瘤样蛋白 2 (Retinoblastoma-like Protein 1, RBL2/p130) 是视网膜母细胞瘤 (Rb) 肿瘤抑制因子家族的成员，该家族还包括 Rb (p105) 和视网膜母细胞瘤样蛋白 1 (RBL1, p107)。与其他 Rb 家族蛋白一样，RBL2 包含一个保守的结合口袋，可与关键调控蛋白（如 E2F 转录因子和具有 LXCXE 基序的蛋白）相互作用。在静止的 G0 期细胞中，RBL2 主要处于活性和低磷酸化状态，与 E2F4 和 E2F5 结合形成 DREAM 复合物，抑制进入 S 期和有丝分裂所必需的基因的转录。这种抑制会阻止细胞周期进程。在生长因子刺激下，RBL2 被细胞周期蛋白依赖性激酶 (CDK) 过度磷酸化并释放 E2F 因子，导致转录激活和细胞周期进程。RBL2 通过保持低磷酸化状态在维持细胞衰老方面发挥着至关重要的作用，这对于衰老细胞的稳定性至关重要。

背景

视网膜母细胞瘤样蛋白 2 (Retinoblastoma-like Protein 1, RBL2/p130) 是视网膜母细胞瘤 (Rb) 肿瘤抑制因子家族的成员，该家族还包括 Rb (p105) 和视网膜母细胞瘤样蛋白 1 (RBL1, p107)。与其他 Rb 家族蛋白一样，RBL2 包含一个保守的结合口袋，可与关键调控蛋白（如 E2F 转录因子和具有 LXCXE 基序的蛋白）相互作用。在静止的 G0 期细胞中，RBL2 主要处于活性和低磷酸化状态，与 E2F4 和 E2F5 结合形成 DREAM 复合物，抑制进入 S 期和有丝分裂所必需的基因的转录。这种抑制会阻止细胞周期进程。在生长因子刺激下，RBL2 被细胞周期蛋白依赖性激酶 (CDK) 过度磷酸化并释放 E2F 因子，导致转录激活和细胞周期进程。RBL2 通过保持低磷酸化状态在维持细胞衰老方面发挥着至关重要的作用，这对于衰老细胞的稳定性至关重要。

参考文献
[1] Du W, et al. Oncogene. 2006 Aug 28;25(38):5190-200. [2] Giacinti C, et al. Oncogene. 2006 Aug 28;25(38):5220-7.

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