ROR2 Rabbit mAb
目录号: F1385
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Lane 1: T-470
Lane 2: Saos-2
Lane 3: SH-SY5Y
操作要点
WB
蛋白定位
细胞膜; 内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 135 kDa |
| 阳性对照 | T-47D; SH-SY5Y; Saos-2 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 200mA 150min)。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
ROR2 Rabbit mAb识别内源性ROR2总蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q01974 |
| 克隆号 |
|---|
| G16A24 |
| 背景 |
|---|
受体酪氨酸激酶样孤儿受体 2 (Ror2) 是一种非典型 Wnt 受体，对骨形态发生至关重要。早期胚胎发生过程中 Ror2 的突变或缺失会导致人类和小鼠模型中的肢体缩短。在小鼠中，Ror2 表达仅限于妊娠早期和间充质干细胞微环境。Ror2 介导发育过程和癌症中的各种 Wnt 信号，与典型和非典型 Wnt 都有关。它调节汇聚延伸运动、平面细胞极性和增殖。 Ror2 与 Wnt5a 的相互作用会抑制典型信号传导，而其表达会增加 β-catenin 的稳定性和典型 Wnt 靶基因的活性，而不依赖于外源性 Wnt3a。Ror2 还独立于 LRP 发挥作用，在肾细胞中维持稳定的 β-catenin 池，增强对 Wnt3a 诱导的 β-catenin 信号的响应。 |
| 参考文献 |
|---|
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