SHIP2 Rabbit mAb
目录号: F1964
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Lane 1: OVCAR8
Lane 2: LN18
Lane 3: HeLa
操作要点
WB
蛋白定位
细胞膜; 细胞突起; 细胞质; 细胞骨架; 内膜; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP, IF, FCM |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 160 kDa |
| 阳性对照 | OVCAR8; LN18; HeLa |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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| IF |
|---|
实验步骤：
标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
SHIP2 Rabbit mAb 可检测内源性总 SHIP2 的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| O15357 |
| 克隆号 |
|---|
| C21E14 |
| 背景 |
|---|
SHIP2 是一种磷酸酶，专门作用于磷脂酰肌醇 3,4,5-三磷酸的 5 位。SHIP1 是一种相关的胞浆磷酸酶，其 N 端具有 SH2 结构域，C 端具有两个 NPXY Shc 结合基序。受体交联后，SHIP 通过将其 SH2 结构域与 ITIM 基序中的磷酸酪氨酸结合而被募集到膜连接处，随后在 NPXY 基序上进行酪氨酸磷酸化。SHIP2 是负责磷酸肌醇或肌醇磷酸 5 位去磷酸化的几种酶之一。它与影响骨骼发育的疾病 opsismodysplasia 有关，并与参与胰岛素信号传导、细胞骨架组织和免疫系统功能的蛋白质相互作用。SHIP2 的可逆磷酸化对于其与其他蛋白质的相互作用、其在磷酸肌醇信号传导中的作用及其催化活性至关重要。 SHIP2 在细胞黏附和扩散中也发挥重要作用，这可能是通过其与 p130Cas 衔接蛋白（也称为乳腺癌抗雌激素抗性蛋白 1）的相互作用实现的。该蛋白介导肌动蛋白细胞骨架组织，并通过其 SH2 结构域与磷酸化的 SHIP2 结合。SHIP2 是 SHIP1 的同源物，主要在心脏、骨骼肌和胎盘中表达。在某些细胞类型中，降低 INPPL1 表达或抑制 SHIP2 活性已被证明会诱导细胞凋亡。 |
| 参考文献 |
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