SirT6 Rabbit mAb
目录号: F0510
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Lane 1: HCT116
Lane 2: C2C12
Lane 3: COS7
操作要点
WB
蛋白定位
染色体；内质网 ；细胞核；端粒
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP, IF |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 42, 36 kda |
| 阳性对照 | HCT 116; C2C12; H-4-II-E; COS-7; MET (WT Sirt6) |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 150mA 90min)。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
| IF |
|---|
实验步骤： 标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
SirT6 Rabbit mAb识别内源性SirT6总蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q8N6T7 |
| 克隆号 |
|---|
| H13M15 |
| 背景 |
|---|
沉默信息调节因子 (Sir2) 是最早于酿酒酵母中被发现的Sirtuins家族蛋白。这是一组保守的基因，编码烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NAD) 依赖性蛋白脱乙酰酶，也称为 III 类组蛋白脱乙酰酶。它在沉默交配型基因座、端粒维持、DNA 损伤反应和细胞衰老中发挥作用。Sirtuin 6 (SIRT6) 是该家族的另一种组蛋白脱乙酰酶，对各种细胞通路至关重要。缺乏 SIRT6 的小鼠表现出自发的基因组不稳定性、糖酵解失调、肿瘤发生率增加和衰老样退化的早期发生。SIRT6 位于细胞核中，它促进 DNA 修复、调节代谢基因表达并确保基因组稳定性。它被认为是一种肿瘤抑制因子和长寿促进剂。SIRT6 主要通过去乙酰化组蛋白和非组蛋白来调节这些过程，但它也进行长链去乙酰化、ADP-核糖基化，并将蛋白质募集到染色质。SIRT6 的功能可分为三大类：(i) 将因子募集到染色质，(ii) 通过组蛋白去乙酰化辅助抑制转录因子，以及 (iii) 去乙酰化非组蛋白以改变其定位或活性。此外，SIRT6 还充当先锋因子，直接结合 DNA 损伤位点，并整体去乙酰化着丝粒和端粒 DNA，以防止异常转录和端粒损伤。 |
| 参考文献 |
|---|
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