SirT7 Rabbit mAb
目录号: F0660
操作要点
WB
蛋白定位
染色质; 细胞质; 细胞核
建议使用 RIPA/核裂解液 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 45 kDa |
| 阳性对照 | 293； F9; H-4-II-E; COS-7 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
SirT7 Rabbit mAb 可检测内源性总 SIRT7 的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| SirT7 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q9NRC8 |
| 克隆号 |
|---|
| K23K24 |
| 背景 |
|---|
sirtuins 是一种 NAD+ 依赖性脱乙酰酶，其失调已被确定为各种严重人类疾病（包括糖尿病、神经系统疾病、心血管疾病和癌症）发生和发展的主要因素。哺乳动物中的 sirtuins 家族由七个成员（SIRT1-SIRT7）组成，它们共享一个保守的催化域，但在 N 端和 C 端区域存在显著差异。sirtuins 主要被认为是调控许多生物过程的关键脱乙酰酶，例如细胞增殖、存活、基因组稳定性和代谢。它们通过表观遗传调控基因表达和染色质重塑来实现这一点，要么直接去乙酰化特定的组蛋白残基，要么调控其他组蛋白修饰酶。SIRT7 在哺乳动物 sirtuins 中是独一无二的，因为它主要定位在核仁中，核仁是参与核糖体生物合成的重要细胞器。在核仁内，SIRT7 与SIRT1 通过保留这些位点的异染色质结构来维持正常细胞中沉默核糖体 DNA (rDNA) 基因的稳定性。这一作用可防止重复 rDNA 序列的同源重组，从而防止整体基因组不稳定性，这是维持基因组完整性和防止细胞转化和衰老的关键策略。SIRT7 被序列特异性转录因子（如 Elk-4）招募到染色质中，在那里它使基因启动子上赖氨酸 18 (H3K18) 的组蛋白 H3 脱乙酰化，从而导致转录抑制。值得注意的是，SIRT7 的过度表达会导致 H3K18 乙酰化的整体减少，这种变化与前列腺癌、肺癌、肾癌和胰腺癌等癌症的不良预后有关。此外，SIRT7 对于 E1A 介导的 H3K18 乙酰化降低至关重要，可促进细胞周期进入并使细胞绕过接触抑制。 |
| 参考文献 |
|---|
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