Somatostatin Receptor 2 Rabbit mAb
目录号: F1583
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Lane 1: U937
Lane 2: INS-1 cell lysates
Lane 3: HEK-293 (transfected with Somatostatin Receptor 2)
操作要点
WB
蛋白定位
细胞膜; 细胞质
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
实验注意事项
（1）建议使用 1% SDS 热裂解方法制备裂解物。如使用常规裂解方法，可能使检测到的蛋白信号较弱。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IHC |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 41 kDa |
| 阳性对照 | Human brain; Human pancreas; Human breast carcinoma; Human cervical cancer xenograft; Mouse brain; U937, INS-1 HEK-293 |
|---|---|
| 阴性对照 | A549; MCF7; MDA-MB-231 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 90min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
| IHC |
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实验步骤：
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
Somatostatin Receptor 2 Rabbit mAb 可检测内源性生长抑素受体 2 (Somatostatin Receptor 2, SSTR2) 总的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P30874 |
| 克隆号 |
|---|
| F8A18 |
| 背景 |
|---|
生长抑素受体 2 (SSTR2) 是 G 蛋白偶联受体的一个突出亚型，可介导中枢神经系统、胃肠道和内分泌胰腺产生的肽激素生长抑素 (SST) 的作用。SSTR2 调控各种生理过程并抑制激素分泌、细胞增殖和血管生成。它是胃肠胰腺 (GEP) 系统和直肠内神经内分泌肿瘤 (NET) 中最常见的 SSTR 亚型。神经内分泌肿瘤 (NET) 中 SSTR2 水平升高可增强生长抑素类似物 (SSA)（如奥曲肽和兰瑞肽）的疗效，这些药物靶向 SSTR2 来抑制肿瘤生长和激素分泌。神经内分泌肿瘤 (NET) 中 SSTR2 水平升高可增强生长抑素类似物 (SSA)（如奥曲肽和兰瑞肽）的疗效，这些药物靶向 SSTR2 来抑制肿瘤生长和激素分泌。在胰腺胰岛中，SSTR2 主要存在于 β 细胞和 α 细胞中，并通过膜超极化、抑制 P/Q 型 Ca2+ 通道和抑制胞吐等机制调控激素释放。它也是神经内分泌肿瘤 (NET) 诊断和治疗中的关键生物标志物。 |
| 参考文献 |
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