TAK1 (H23P12) Rabbit mAb
目录号: F3341
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IHC, IF, FCM |
| 抗体类型 |
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| Rabbit |
| 反应性 |
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| Human |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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35 kDa, 36 kDa, 43 kDa, 47 kDa, 60 kDa, 67 kDa, 74 kDa
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实验方法
| IF |
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| IHC |
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实验步骤：
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
22. 用盖玻片和封固剂封固切片。
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生物描述
| 特异性 |
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| TAK1 (H23P12) Rabbit mAb 用于检测内源性 TAK1 总的蛋白水平。 |
| 克隆号 |
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| H23P12 |
| 背景 |
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| TAK1是MAP3K家族中的一种关键丝氨酸/苏氨酸激酶，作为炎症与应激信号通路的重要调控因子发挥作用。它由促炎细胞因子（如TNFα、IL-1β、LPS和TGFβ）激活，并与TAK1结合蛋白（TAB1、TAB2、TAB3）形成三元复合体。TAK1的激活涉及在Thr178、Thr184、Thr187和Ser192处的磷酸化，以及在Lys158处的K63连接多聚泛素化。从结构上看，TAK1由N端和C端叶通过铰链区域连接，内含一个对激酶活性至关重要的ATP结合口袋；催化性赖氨酸及Ala107、Glu105等残基促进ATP结合，而以Phe484为中心的螺旋环稳定了与TAB1的相互作用，从而诱导出必要的构象变化。TAK1主要通过激活IKK复合体介导TNF受体（TNFR1）信号，导致NF-κB转移至细胞核并激活促炎基因转录；此外，它还通过MKK3/4/6激活p38和JNK，调控细胞存活与凋亡。TAK1的活性受到去泛素化酶（USP4、USP18、USP19、USP8、Cyld）及泛素连接酶（Itch）的严格调控，同时通过甲基化、SUMO化、乙酰化和O‑GlcNAc修饰等翻译后修饰进一步精细调控，影响免疫反应和肿瘤发生。TAK1的过度激活与自身免疫疾病和癌症有关，而其抑制则可诱发RIPK1依赖性细胞死亡。 |
| 参考文献 |
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