抗体应用：
反应性：
操作要点
蛋白定位：细胞核。
WB
建议使用 RIPA/Nuclear Lysis Buffer 制备裂解物。
WB
建议使用 RIPA/Nuclear Lysis Buffer 制备裂解物。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP, ChIP |
| 反应性 |
|---|
| Human |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃ |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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58 kDa, 79 kDa
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| 阳性对照 | HCT116; SW620; Colo201; HepG2 |
|---|---|
| 阴性对照 |
样品处理数据示例
| 样品 | 处理情况 |
| HT15 | Low expression |
| 点击查看更多样品数据 | |
*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
TCF4/TCF7L2 Rabbit mAb 用于检测内源性 TCF4/TCF7L2 总的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| TCF-4,TCF7L2 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q9NQB0 |
| 克隆号 |
|---|
| P1D24 |
| 背景 |
|---|
TCF4（转录因子 4）和 TCF7L2（T 细胞因子 7 样 2）是 TCF/LEF 家族的转录因子，是 Wnt/β-catenin 信号通路的核心，可调控细胞命运、分化和代谢。从结构上讲，这两种蛋白质都含有高迁移率族 (HMG) 盒结构域，可进行 DNA 结合和转录调控。在没有 β-catenin 的情况下，它们通过募集 Groucho/TLE 等共抑制因子充当转录抑制因子，但当 β-catenin 结合时，它们会切换到激活因子，从而驱动 Wnt 靶基因的表达。 TCF4 主要参与神经发育，调控神经祖细胞分化和成熟，而 TCF7L2 在代谢调控中起关键作用，影响脂肪生成、葡萄糖稳态和胰岛素分泌。TCF4 对大脑发育至关重要，并导致皮特-霍普金斯综合征，这是一种由 TCF4 突变引起的神经发育障碍。TCF7L2 与 2 型糖尿病 (T2D) 有关，rs7903146 等基因变异会通过损害胰岛素分泌和 β 细胞功能来增加患病风险。TCF4 失调会导致神经系统疾病和癌症（如结直肠癌），而 TCF7L2 与代谢疾病和心血管健康有关。 |
| 参考文献 |
|---|
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