TMPRSS2 Rabbit mAb
目录号: F2598
抗体应用：
反应性：
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IHC |
| 反应性 |
|---|
| Human |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃ |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
|
预测分子量
实际分子量
|
|---|
|
54 kDa
25 kDa, 55 kDa
|
| *为什么预测分子量和实际分子量会有不同？ 以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。 |
| 阳性对照 | Human prostate adenocarcinoma; LNCaP; Caco-2 |
|---|---|
| 阴性对照 | Human Colon cell; Human Lung cell; DU 145 cell |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。
2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。
3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。
4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表
2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；
4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表
湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育
1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；
2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
TMPRSS2 Rabbit mAb可检测内源性 TMPRSS2 总蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| PRSS10, TMPRSS2, Transmembrane protease serine 2, Serine protease 10 |
| Uniprot ID |
|---|
| O15393 |
| 克隆号 |
|---|
| L10D17 |
| 背景 |
|---|
TMPRSS2（跨膜丝氨酸蛋白酶2）是一种II型跨膜丝氨酸蛋白酶，由492个氨基酸组成，具有胞质N末端结构域、跨膜结构域、A类受体结构域、富含半胱氨酸的清道夫受体（SRCR）结构域和C末端丝氨酸蛋白酶结构域。它主要在前列腺、呼吸道、胃肠道和其他组织的上皮细胞中表达，在前列腺中受雄激素调节的表达尤其高。 TMPRSS2 在促进多种包膜病毒（包括 SARS-CoV-2、SARS-CoV、MERS-CoV 和流感病毒）入侵方面发挥着至关重要的作用。它通过在特定位点（例如 S1/S2 和 S2'）裂解并激活病毒表面蛋白（例如刺突蛋白 (S) 或血凝素 (HA) 蛋白）来触发膜融合。它与弗林蛋白酶协同作用，增强病毒在宿主细胞表面的感染性，从而绕过内体进入途径。TMPRSS2 与前列腺癌的发生发展有关，尤其是通过 TMPRSS2-ERG 等基因融合，并可能调节宿主在炎症、癌症转移和激素驱动信号传导中的反应。此外，TMPRSS2 参与上皮细胞钠通道 (ENaC) 的蛋白水解激活，有助于气道上皮细胞的钠转运和正常的呼吸功能。 |
| 参考文献 |
|---|
技术支持
在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。
* 必填项
