UBE2N Rabbit mAb
目录号: F1395
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Lane 1: 293t
Lane 2: U-2 OS
Lane 3: HCT 116
Lane 4: SW620
Lane 5: 3T3
Lane 6: C6
Lane 7: COS-7
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 17 kDa |
| 阳性对照 | 293T (untreated or transfected with hUBE2N-Myc/DDK); HCT 116; U-2 OS; KM12; NIH/3T3; SW620; mIMCD-3; C6; H-4-Il-E; COS-7; Vero |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜(湿转法参考条件: 150mA 50min)。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
UBE2N Rabbit mAb抗识别内源性UBE2N/Ubc13总蛋白水平。该抗体与UBE2D家族成员无交叉反应。 |
| 别名 |
|---|
| UBC13,UBE2N |
| Uniprot ID |
|---|
| P61088 |
| 克隆号 |
|---|
| B19H3 |
| 背景 |
|---|
UBE2N（也称为 UBC13）是一种 K63 泛素特异性 E2 结合酶，在各种细胞过程中发挥关键作用。它与 UBE2V1（也称为 UEV1A）和 UBE2V2（也称为 MMS2）形成异二聚体，以介导 K63 连接的多泛素化。 UBE2N/UBE2V1 异二聚体与作为 E3 连接酶的 TRAF6 一起激活 NF-κB 和 MAPK 信号通路，这对于免疫反应和胚胎发生至关重要。UBE2N/UBE2V2 异二聚体主要在细胞核中参与 DNA 修复和细胞周期调控。UBE2N 还在维持表皮稳态和皮肤免疫方面发挥重要作用。通过IRAK1/4通路对炎症性皮肤疾病具有潜在的治疗意义。此外，UBE2N通过促进p53的单体形态和降低其转录活性来调节p53，影响细胞周期和凋亡。 |
| 参考文献 |
|---|
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