抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Hela, Lane 2: C2C12, Lane 3: COS-7, Lane 4: H-4-II-E
客户使用Selleck的WDR5 Rabbit mAb发表文献1篇
操作要点
WB
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
建议曝光 60s 以上。
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
建议曝光 60s 以上。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, ChIP |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃ |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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37 kDa
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| 阳性对照 | HeLa; C2C12; H-4-II-E; COS-7; NCCIT |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 将细胞转移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声破碎，冰上静置裂解 30 min。冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。(建议曝光时长 60s 以上)。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
WDR5 Rabbit mAb 用于检测内源性 WDR5 总的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P61964 |
| 克隆号 |
|---|
| P9M1 |
| 背景 |
|---|
WDR5（WD 重复域 5）是一种关键的调控蛋白，通过调控组蛋白在基因表达中发挥核心作用修饰，特别是组蛋白 H3 在赖氨酸 4 (H3K4) 处的三甲基化，这是一种与活性转录相关的标记。WDR5 是几种组蛋白甲基转移酶复合物的核心成分，包括 MLL1-4 和 SET1A/B，它促进这些复合物与其他蛋白质（如 RBBP5、ASH2L 和 DPY30）的组装。这些复合物对于 H3K4 三甲基化至关重要，而 H3K4 三甲基化是转录激活靶基因所必需的，这些靶基因参与关键的生物过程，如多能性、细胞分化和发育。WDR5 与各种转录因子和非编码 RNA 相互作用，进一步影响基因调控。WDR5 对干细胞自我更新、癌细胞增殖和转移至关重要。WDR5 失调通过持续表达致癌基因促进肿瘤发生，从而导致白血病、前列腺癌和乳腺癌。 |
| 参考文献 |
|---|
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