ADAM9 Antibody [M15P12]

目录号: F9371

抗体应用：反应性：Human, Mouse, Rat, Monkey

Lane 1: Hela, Lane 2: PC12, Lane 3: NIH/3T3, Lane 4: C2C12

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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使用信息

稀释比例
WB1:1000

抗体应用
WB

反应性
Human, Mouse, Rat, Monkey

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
100-115 kDa, 75-80 kDa

阳性对照	HeLa cells; COS-7 cells; C6 cells; PC12 cells; MTLN3 cells; NIH/3T3 cells; C2C12 cells
阴性对照

实验方法

WB
实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
ADAM9 Antibody [M15P12] 可检测内源性 ADAM9 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞膜，内膜系统，细胞外环境

Uniprot ID
Q13443

克隆号
M15P12

别名
Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 9; ADAM 9; Cellular disintegrin-related protein; Meltrin-gamma; Metalloprotease/disintegrin/cysteine-rich protein 9; Myeloma cell metalloproteinase; ADAM9; KIAA0021; MCMP; MDC9; MLTNG

背景
ADAM9，又名Meltrin γ，属于ADAM家族的跨膜金属蛋白酶，兼具蛋白水解和细胞黏附功能。该蛋白由819个氨基酸组成，成熟分子量为84 kDa，其结构包括：信号肽（1-29）、通过半胱氨酸开关维持潜伏状态的前结构域（30-205）、含有HEXXHXXGXXH催化基序的锌依赖性金属蛋白酶结构域（212-427）、含有整合素结合基序的解整合素结构域（413-503）、富含半胱氨酸的结构域（507-627）、EGF样重复序列、跨膜螺旋（707-728）以及含有SH3结合脯氨酸富集区的胞质尾。类弗林蛋白酶切割RSKRR125↓SV处的蛋白前结构域以激活蛋白水解，而ADAM9则通过富含半胱氨酸的结构域形成同源二聚体，从而暴露活性位点。ADAM9可释放EGFR配体（HB-EGF、TGF-α）、MET、ErbB3/4、Notch和APP的胞外结构域，释放出可溶性形式，这些形式通过MAPK/ERK、PI3K/AKT和Notch信号通路驱动细胞增殖、迁移和存活。解整合素结构域结合α6β1、αvβ3/6和α2β1整合素，在不依赖催化的情况下调节细胞黏附、迁移和侵袭。富含半胱氨酸和EGF样区域与聚糖蛋白和细胞外基质成分相互作用，从而在血管生成和伤口愈合过程中调节基质重塑。 ADAM9 与 Src、PKC 和四跨膜蛋白（CD9、CD151）的胞质相互作用，精细调控侵袭伪足处的运输和活性。ADAM9 通过切割 ZP2/3 调控受精，通过 Notch/MEF2C 调控肌生成，调控视网膜色素上皮分化和免疫细胞渗出。在癌症中，乳腺癌、前列腺癌、肺癌、胰腺癌和脑肿瘤中 ADAM9 的上调通过 EGFR 激活、EMT 和血管生成促进转移；敲除 ADAM9 可使侵袭能力降低 80%。ADAM9 将 APP 加工成神经保护素片段，从而对抗 β-淀粉样蛋白的积累。ADAM9 通过整合素脱落和巨噬细胞浸润在类风湿性关节炎中发挥炎症作用。这些作用使 ADAM9 成为发育和病理过程中黏附动力学和生长因子生物利用度的关键调节因子。

背景

ADAM9，又名Meltrin γ，属于ADAM家族的跨膜金属蛋白酶，兼具蛋白水解和细胞黏附功能。该蛋白由819个氨基酸组成，成熟分子量为84 kDa，其结构包括：信号肽（1-29）、通过半胱氨酸开关维持潜伏状态的前结构域（30-205）、含有HEXXHXXGXXH催化基序的锌依赖性金属蛋白酶结构域（212-427）、含有整合素结合基序的解整合素结构域（413-503）、富含半胱氨酸的结构域（507-627）、EGF样重复序列、跨膜螺旋（707-728）以及含有SH3结合脯氨酸富集区的胞质尾。类弗林蛋白酶切割RSKRR125↓SV处的蛋白前结构域以激活蛋白水解，而ADAM9则通过富含半胱氨酸的结构域形成同源二聚体，从而暴露活性位点。ADAM9可释放EGFR配体（HB-EGF、TGF-α）、MET、ErbB3/4、Notch和APP的胞外结构域，释放出可溶性形式，这些形式通过MAPK/ERK、PI3K/AKT和Notch信号通路驱动细胞增殖、迁移和存活。解整合素结构域结合α6β1、αvβ3/6和α2β1整合素，在不依赖催化的情况下调节细胞黏附、迁移和侵袭。富含半胱氨酸和EGF样区域与聚糖蛋白和细胞外基质成分相互作用，从而在血管生成和伤口愈合过程中调节基质重塑。 ADAM9 与 Src、PKC 和四跨膜蛋白（CD9、CD151）的胞质相互作用，精细调控侵袭伪足处的运输和活性。ADAM9 通过切割 ZP2/3 调控受精，通过 Notch/MEF2C 调控肌生成，调控视网膜色素上皮分化和免疫细胞渗出。在癌症中，乳腺癌、前列腺癌、肺癌、胰腺癌和脑肿瘤中 ADAM9 的上调通过 EGFR 激活、EMT 和血管生成促进转移；敲除 ADAM9 可使侵袭能力降低 80%。ADAM9 将 APP 加工成神经保护素片段，从而对抗 β-淀粉样蛋白的积累。ADAM9 通过整合素脱落和巨噬细胞浸润在类风湿性关节炎中发挥炎症作用。这些作用使 ADAM9 成为发育和病理过程中黏附动力学和生长因子生物利用度的关键调节因子。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33096780/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32875951/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%