ANP Antibody [M21G12]
目录号: F4482
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Mouse heart, Lane 2: Rat heart
操作要点
WB
湿转参考条件：200 mA, 60 min，建议使用 0.22 μm PVDF膜。
建议一抗稀释比: 1:100
湿转参考条件：200 mA, 60 min，建议使用 0.22 μm PVDF膜。
建议一抗稀释比: 1:100
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP, IF, ELISA |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 抗体类型 |
|---|
| Mouse Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
|
预测分子量
|
|---|
|
17 kDa
|
| 阳性对照 | Rat heart tissue; Mouse heart tissue |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:100），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
|
| IF |
|---|
实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
| ANP Antibody [M21G12] 可检测内源性 ANP 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞突起，细胞外环境 |
| Uniprot ID |
|---|
| P01160 |
| 克隆号 |
|---|
| M21G12 |
| 别名 |
|---|
| NPPA, Natriuretic peptides A, proANF, preproANP, proANP, Atriopeptigen, proANP 95-126, Auriculin-C, Atrial natriuretic factor 1-33, ANF 1-33, ANP, PND |
| 背景 |
|---|
| 心房利钠肽 (ANP) 是心脏利钠肽家族的成员，它在心房肌细胞中以 pre-proANP 的形式合成，在分泌颗粒中加工成 proANP，然后在分泌时被跨膜丝氨酸蛋白酶 corin 切割，生成具有生物活性的循环激素。ANP 与脑利钠肽 (BNP) 和 C 型利钠肽 (CNP) 属于同一家族，并具有受体结合所需的保守二硫键环状结构。成熟的ANP肽包含一个由17个氨基酸残基组成的中心环，该环由分子内二硫键形成，两侧是柔性的N端和C端片段。该环与靶细胞上的鸟苷酸环化酶偶联利钠肽受体A（NPR-A，也称GC-A）结合，激活其内在的环化酶结构域，增加细胞内cGMP水平，并启动下游信号通路。ANP-NPR-A信号通路激活cGMP依赖性蛋白激酶G、cGMP调节的磷酸二酯酶和离子通道，降低血管平滑肌细胞的胞质钙浓度，从而引起血管舒张。在肾脏中，该信号通路作用于肾小球和肾小管，增加肾小球滤过率，抑制集合管对钠的重吸收，增强钠排泄和利尿作用，从而降低血浆容量和动脉血压。心钠素（ANP）通过抑制肾素和醛固酮的分泌来抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统，并降低交感神经系统活性，因此该肽发挥着协调的拮抗调节激素的作用，拮抗血管收缩和钠潴留通路，从而稳定心血管和容量稳态。ANP的分泌与心房壁的扩张密切相关；容量负荷或静脉回流增加引起的心房机械扩张会触发含ANP颗粒的快速胞吐，而心房快速性心律失常、血管收缩剂引起的前负荷或后负荷增加以及内皮因子（如内皮素和一氧化氮）会进一步调节ANP的释放，从而确立了心房扩张和旁分泌信号传导是循环ANP水平的主要决定因素。在转录水平上，生理条件下ANP主要表达于心房，但在应激心室中表达显著上调。ANP基因是病理性心脏肥大和重塑的公认标志物，心肌和血浆ANP水平升高反映了心壁应力增加和血流动力学负荷改变。在肾脏和心血管疾病中，循环ANP水平在容量扩张状态下（例如心力衰竭和慢性肾脏病）升高，并参与代偿性利钠和血管舒张反应；而ANP信号传导受损或受体反应性降低则与高血压、心脏肥大和心力衰竭进展相关。 |
| 参考文献 |
|---|
|
技术支持
在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。
* 必填项
