APC11 Antibody [G19D9]

目录号: F9819

抗体应用：反应性：Human, Mouse, Rat, Monkey

Lane 1: Hela, Lane 2: U2OS, Lane 3: H-4-II-E, Lane 4: COS-7

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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操作要点

WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：20%。
湿转参考条件：200 mA, 60 min，建议使用 0.22 μm PVDF膜。

使用信息

稀释比例
WB1:1000 IP1:100

抗体应用
WB, IP

反应性
Human, Mouse, Rat, Monkey

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
10 kDa

阳性对照	HeLa cells; OVCAR3 cells; LOX-IMVI cells; 293T cells
阴性对照	U-2 OS cells; T-47D cells; SK-MEL-5 cells; RPMI 8226 cells; ACHN cells; PC-3 cells; Hepa 1-6 cells; A20 cells; RBL-2H3 cells; H-4-II-E cells; COS-7 cells

实验方法

WB
实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：20 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 60 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：20 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 60 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
APC11 Antibody [G19D9] 可检测内源性 APC11 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞质，细胞核

Uniprot ID
Q9NYG5

克隆号
G19D9

别名
Anaphase-promoting complex subunit 11; APC11; Cyclosome subunit 11; Hepatocellular carcinoma-associated RING finger protein; ANAPC11

背景
后期促进复合物亚基11 (APC11) 是一种小型RING-H2指状蛋白，是后期促进复合物/细胞周期体 (APC/C) 的组成部分。APC/C 是一种E3泛素连接酶，通过26S蛋白酶体靶向降解关键调控蛋白，促进细胞周期从中期进入后期。APC11包含一个典型的RING-H2结构域，该结构域由非串联的组氨酸和半胱氨酸残基组成，这些残基可配位锌离子，并使其结构与SCF型E3连接酶RBX1和RBX2的RING结构域相似。在APC/C复合物中，APC11与类cullin亚基APC2形成异二聚体，构成催化核心。该APC2-APC11模块作为泛素受体支架，募集泛素化的E2酶，例如UBE2S和UBE2C，从而使多聚泛素链在APC/C底物上组装。APC/C复合物的活性依赖于共激活因子CDC20和Cdh1（FZR1），它们通过D-box和KEN-box基序识别底物蛋白，并将其呈递至APC2-APC11-APC10泛素化位点，确保细胞周期蛋白、Securin和其他细胞周期调节因子的及时周转。破坏APC11 RING-H2指结构完整性的突变会阻断泛素链的形成，并损害APC/C依赖的底物降解。 APC11 是中期到后期转变、染色体分离和退出有丝分裂所必需的，它被研究为 APC/C 的核心催化成分，以及细胞周期控制和基因组稳定性途径中的机制节点。

背景

后期促进复合物亚基11 (APC11) 是一种小型RING-H2指状蛋白，是后期促进复合物/细胞周期体 (APC/C) 的组成部分。APC/C 是一种E3泛素连接酶，通过26S蛋白酶体靶向降解关键调控蛋白，促进细胞周期从中期进入后期。APC11包含一个典型的RING-H2结构域，该结构域由非串联的组氨酸和半胱氨酸残基组成，这些残基可配位锌离子，并使其结构与SCF型E3连接酶RBX1和RBX2的RING结构域相似。在APC/C复合物中，APC11与类cullin亚基APC2形成异二聚体，构成催化核心。该APC2-APC11模块作为泛素受体支架，募集泛素化的E2酶，例如UBE2S和UBE2C，从而使多聚泛素链在APC/C底物上组装。APC/C复合物的活性依赖于共激活因子CDC20和Cdh1（FZR1），它们通过D-box和KEN-box基序识别底物蛋白，并将其呈递至APC2-APC11-APC10泛素化位点，确保细胞周期蛋白、Securin和其他细胞周期调节因子的及时周转。破坏APC11 RING-H2指结构完整性的突变会阻断泛素链的形成，并损害APC/C依赖的底物降解。 APC11 是中期到后期转变、染色体分离和退出有丝分裂所必需的，它被研究为 APC/C 的核心催化成分，以及细胞周期控制和基因组稳定性途径中的机制节点。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34887878/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10922056/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%